飽和変異誘発による微調整酵素活性

コドン飽和は、タンパク質構造機能関係と微調整酵素活性を分析するための強力なツールです。この手法では、1つ以上の重要なアミノ酸は、縮退コドンをポリメラーゼ媒介プライマー伸長反応に関心のある遺伝子に組み込むことにより、無作為化されます。コドン飽和変異誘発の従来の方法は労働集約的であり、通常、複数回のPCRと制限/ライゲーションベースのクローニングが必要です。対照的に、QuikChangeマルチサイト指向の突然変異誘発キットは、退化したコドンを二本鎖プラスミドDNAテンプレートに組み込むための効率的な1日の手順を提供します。もともと複数のサイトで点変異を導入するために開発されたマルチキットは、1つ、2つ、または3つのアミノ酸の部位指向飽和変異誘発を同時に実行するために容易に適合させることができます。適切なスクリーニングアッセイと組み合わせると、この方法は、主要な場所で複数のサイドチェーン置換を調査するプロセスを簡素化します。

Codon saturation is a powerful tool for analyzing protein structure-function relationships and fine-tuning enzyme activity. In this technique, one or more key amino acids are randomized by incorporating degenerate codon(s) into a gene of interest in a polymerase-mediated primer extension reaction. Traditional methods for codon saturation mutagenesis are labor-intensive and typically require multiple rounds of PCR and restriction/ligation-based cloning. In contrast, the QuikChange Multi Site-Directed Mutagenesis kit provides an efficient one-day procedure for incorporating degenerate codons into any double-stranded plasmid DNA template. Originally developed for introducing point mutations at multiple sites, the Multi kit can be readily adapted for performing site-directed saturation mutagenesis of one, two, or three amino acids simultaneously. When coupled with a suitable screening assay, this method simplifies the process of surveying multiple side chain replacements at key locations.