新規活性化されたミクログリア/マクロファージWAPドメインタンパク質AMWAPは、炎症性反応の反規制因子として機能します

ミクログリオーシスは、網膜ジストロフィーを含む神経変性障害の一般的な現象です。ミクログリアの活性化に関与する候補遺伝子を特定するために、野生型およびレチノシシン欠損（RS1H（ - /Y））マウスからの網膜ミクログリアのDNAミクロアレイ分析を使用しました。これは、遺伝性網膜変性の原型モデルです。それにより、活性化されたミクログリア/マクロファージWAPドメインタンパク質（AMWAP）と呼ばれるミクログリア/マクロファージ制限ホエイ酸タンパク質（WAP）をコードする新規76 AAタンパク質をクローニングしました。遺伝子は3つのエクソンで構成され、ケモカイン遺伝子クラスターに近接してマウス染色体11にあります。AMWAPのmRNA発現は、rs1H（ - /y）網膜、脳ミクログリア、およびその他の組織マクロファージのミクログリアで検出されました。AMWAP転写は、複数のTLRリガンドとIFN-Gammaによる刺激により、BV-2ミクログリアで急速に誘導されました。AMWAPのTLR依存性発現はNF-Kappabに依存していましたが、そのミクログリア/マクロファージ固有の転写はPU.1によって調節されました。機能的特性評価により、AMWAPの過剰発現は、炎症性サイトカインIL-6およびIL-1BETAを減少させ、代替活性化マーカーArginase 1およびCD206の発現を同時に増加させることが示されました。逆に、AMWAPの小さな干渉RNAノックダウンは、より高いIL-6、IL-1BETA、およびCCL2転写産物レベルにつながりますが、アルギナーゼ1およびCD206発現が減少します。さらに、AMWAP発現細胞は移動能力が低く、抗血糖プロテアーゼ活性を示すトリプシン保護アッセイで接着の増加を示しました。他のWAPタンパク質からの発見と一致して、組換えAMWAPのミクロモル濃度は、大腸菌、緑膿菌、および亜ティル菌に対して有意な成長阻害活性を示しました。まとめると、AMWAPは炎症性ミクログリア/マクロファージの活性化の反規制因子であり、神経変性における自然免疫の潜在的な変調器であることを提案します。

Microgliosis is a common phenomenon in neurodegenerative disorders, including retinal dystrophies. To identify candidate genes involved in microglial activation, we used DNA-microarray analysis of retinal microglia from wild-type and retinoschisin-deficient (Rs1h(-/Y)) mice, a prototypic model for inherited retinal degeneration. Thereby, we cloned a novel 76 aa protein encoding a microglia/macrophage-restricted whey acidic protein (WAP) termed activated microglia/macrophage WAP domain protein (AMWAP). The gene consists of three exons and is located on mouse chromosome 11 in proximity to a chemokine gene cluster. mRNA expression of AMWAP was detected in microglia from Rs1h(-/Y) retinas, brain microglia, and other tissue macrophages. AMWAP transcription was rapidly induced in BV-2 microglia upon stimulation with multiple TLR ligands and IFN-gamma. The TLR-dependent expression of AMWAP was dependent on NF-kappaB, whereas its microglia/macrophage-specific transcription was regulated by PU.1. Functional characterization showed that AMWAP overexpression reduced the proinflammatory cytokines IL-6 and IL-1beta and concomitantly increased expression of the alternative activation markers arginase 1 and Cd206. Conversely, small interfering RNA knockdown of AMWAP lead to higher IL-6, IL-1beta, and Ccl2 transcript levels, whereas diminishing arginase 1 and Cd206 expression. Moreover, AMWAP expressing cells had less migratory capacity and showed increased adhesion in a trypsin-protection assay indicating antiserine protease activity. In agreement with findings from other WAP proteins, micromolar concentrations of recombinant AMWAP exhibited significant growth inhibitory activity against Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Bacillus subtilis. Taken together, we propose that AMWAP is a counter-regulator of proinflammatory microglia/macrophage activation and a potential modulator of innate immunity in neurodegeneration.