DNA損傷と修復の分析のための彗星フィッシュアッセイ

この章では、紫外線光によってヒト細胞で誘導される病変の発生率と修復を研究するために、蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）技術と組み合わせたアルカリ単一細胞ゲル電気泳動（cometアッセイ）について説明します。彗星フィッシュ法により、ゲノム全体および定義された染色体領域全体でのDNA損傷とその修復の同時に比較分析が可能になります。この非常に敏感なアプローチは、化学発がん物質によって誘発されたものや、DNA単一または二本鎖切断に変換できる細胞代謝の産物など、あらゆる病変に適用できます。特定のアプリケーションの方法の独自の利点と制限について説明します。

In this chapter, I describe the alkaline single-cell gel electrophoresis (Comet assay) combined with fluorescence in situ hybridization (FISH) technology, used in our laboratory, to study the incidence and repair of lesions induced in human cells by ultraviolet light. The Comet-FISH method permits the simultaneous and comparative analysis of DNA damage and its repair throughout the genome and in defined chromosomal regions. This very sensitive approach can be applied to any lesion, such as those induced by chemical carcinogens and products of cellular metabolism that can be converted to DNA single- or double-strand breaks. The unique advantages and limitations of the method for particular applications are discussed.