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マロラクティック発酵（MLF）の制御は、ワイン造りにおける困難な目標であり、ワインなどのストレスの多い環境でオエノコッカスのオエニマロラクティックスターター（MLS）を監視するための迅速な方法が必要です。この研究では、培養せずにMLF中にO. oeni株の検出を可能にする新しい定量的PCR（QPCR）アッセイについて説明します。O. oeni株LB221は、識別的なOPA20ベースのランダムに増幅された多型DNA（RAPD）帯域に由来するひずみ配列特性領域（SCAR）マーカーを開発するためのモデルとして使用されました。5 'および3'の隣接領域と瘢痕マーカーのコピー数は、それぞれ逆PCRと南ブロッティングを使用して特徴付けられました。瘢痕配列を標的とするプライマーペア他のO. oeni株またはワイン種の乳酸酸菌（LAB）、酢酸菌（AAB）、および酵母のクロス増幅なしで株固有の検出を可能にしました。SCAR-QPCRアッセイは、細胞濃度の範囲（7 log単位）で線形であり、QPCRとプレートカウントの相関によって示されるように、良好な定量化効果を持つ赤ワインの2.2×10（2）CFUが赤ワインの2.2×10（2）CFUで検出されました。結果。したがって、瘢痕マーカーに基づいたワインの単一O. oeni株の栽培非依存性モニタリングは、迅速かつ効果的なひずみ固有のアプローチを表しています。この戦略は、先住民族のラボ集団に接種されたO. oeni MLSの移植を監視するための簡単で迅速な検出技術を開発し、MLFの失敗のリスクを減らすことができます。
マロラクティック発酵（MLF）の制御は、ワイン造りにおける困難な目標であり、ワインなどのストレスの多い環境でオエノコッカスのオエニマロラクティックスターター（MLS）を監視するための迅速な方法が必要です。この研究では、培養せずにMLF中にO. oeni株の検出を可能にする新しい定量的PCR（QPCR）アッセイについて説明します。O. oeni株LB221は、識別的なOPA20ベースのランダムに増幅された多型DNA（RAPD）帯域に由来するひずみ配列特性領域（SCAR）マーカーを開発するためのモデルとして使用されました。5 'および3'の隣接領域と瘢痕マーカーのコピー数は、それぞれ逆PCRと南ブロッティングを使用して特徴付けられました。瘢痕配列を標的とするプライマーペア他のO. oeni株またはワイン種の乳酸酸菌（LAB）、酢酸菌（AAB）、および酵母のクロス増幅なしで株固有の検出を可能にしました。SCAR-QPCRアッセイは、細胞濃度の範囲（7 log単位）で線形であり、QPCRとプレートカウントの相関によって示されるように、良好な定量化効果を持つ赤ワインの2.2×10（2）CFUが赤ワインの2.2×10（2）CFUで検出されました。結果。したがって、瘢痕マーカーに基づいたワインの単一O. oeni株の栽培非依存性モニタリングは、迅速かつ効果的なひずみ固有のアプローチを表しています。この戦略は、先住民族のラボ集団に接種されたO. oeni MLSの移植を監視するための簡単で迅速な検出技術を開発し、MLFの失敗のリスクを減らすことができます。
Control over malolactic fermentation (MLF) is a difficult goal in winemaking and needs rapid methods to monitor Oenococcus oeni malolactic starters (MLS) in a stressful environment such as wine. In this study, we describe a novel quantitative PCR (QPCR) assay enabling the detection of an O. oeni strain during MLF without culturing. O. oeni strain LB221 was used as a model to develop a strain-specific sequence-characterized amplified region (SCAR) marker derived from a discriminatory OPA20-based randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) band. The 5' and 3' flanking regions and the copy number of the SCAR marker were characterized using inverse PCR and Southern blotting, respectively. Primer pairs targeting the SCAR sequence enabled strain-specific detection without cross amplification of other O. oeni strains or wine species of lactic acid bacteria (LAB), acetic acid bacteria (AAB), and yeasts. The SCAR-QPCR assay was linear over a range of cell concentrations (7 log units) and detected as few as 2.2 × 10(2) CFU per ml of red wine with good quantification effectiveness, as shown by the correlation of QPCR and plate counting results. Therefore, the cultivation-independent monitoring of a single O. oeni strain in wine based on a SCAR marker represents a rapid and effective strain-specific approach. This strategy can be adopted to develop easy and rapid detection techniques for monitoring the implantation of inoculated O. oeni MLS on the indigenous LAB population, reducing the risk of unsuccessful MLF.
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