タンパク質濃度の分光光度測定

このユニットは、溶液中のサンプルタンパク質の濃度を測定するための分光光度および比色法について説明しています。280 nm（A（280））で測定された吸光度は、そのタンパク質（A（280））の標準曲線または公開された吸収率との比較により、タンパク質濃度を計算するために使用されます。あるいは、205 nm（A（205））で測定された吸光度は、タンパク質濃度を計算するために使用されます。A（280）およびA（205）メソッドを使用して、粗溶解物の総タンパク質を定量化し、精製または部分的に精製したタンパク質を定量化できます。分光蛍光量計またはフィルター蛍光計を使用して、サンプル溶液の固有の蛍光発光を測定できます。この値は、サンプル濃度を決定するために標準ソリューションからの排出量と比較されます。蛍光発光法は、精製タンパク質を定量化するために使用されます。この簡単な方法は、希釈タンパク質サンプルに役立ち、短時間で完了することができます。2つの比色測定法があります。色素クーマシーブリリアントブルーの目的のタンパク質への結合に基づくブラッドフォードの比色法と、タンパク質サンプルにおけるチロシル残基の比色反応を測定するローリー法です。

This unit describes spectrophotometric and colorimetric methods for measuring the concentration of a sample protein in solution. Absorbance measured at 280 nm (A(280)) is used to calculate protein concentration by comparison with a standard curve or published absorptivity values for that protein (a(280)). Alternatively, absorbance measured at 205 nm (A(205)) is used to calculate the protein concentration. The A(280) and A(205) methods can be used to quantify total protein in crude lysates and purified or partially purified protein. A spectrofluorometer or a filter fluorometer can be used to measure the intrinsic fluorescence emission of a sample solution; this value is compared with the emissions from standard solutions to determine the sample concentration. The fluorescence emission method is used to quantify purified protein. This simple method is useful for dilute protein samples and can be completed in a short amount of time. There are two colorimetric methods: the Bradford colorimetric method, based upon binding of the dye Coomassie brilliant blue to the protein of interest, and the Lowry method, which measures colorimetric reaction of tyrosyl residues in the protein sample.