髄芽腫細胞におけるRAC1発現のノックダウンによる腫瘍細胞の移動と浸潤の阻害

髄芽腫は、小児または若年成人の一般的な悪性脳腫瘍の1つであり、腫瘍の進行、浸潤、および転移のために、その全体的な病気のない5年生存率は約50％です。この研究の目的は、Rho GtPaseの1つであるRac1が、Rac1発現のノックダウンを通じて髄芽腫細胞の形態、運動性、および浸潤に影響を与える可能性があるかどうかを判断することを目的としています。Medulloblastoma DAOY細胞を使用して、Rac1 shrna、Rac1n17、およびRac1l61コンストラクトを使用してRac1発現を操作しました。逆転写酵素-PCRとウエスタンブロットを使用して、それぞれRAC1 mRNAとタンパク質の発現を検出しました。DAOY細胞の浸潤と移動能力をそれぞれ評価するために、浸潤と移動アッセイを実施しました。データは、RAC1 mRNAとタンパク質がDAOY細胞で過剰発現していることを示しました。RAC1の削除は、架橋されたアクチンネットワークと擬似体を減少させ、コントロール細胞と比較して、移動またはフィルターの反対側に移動または侵入した移動細胞の数を阻害しました。これらのデータは、DAOY細胞の浸潤と移動がRAC1の削除によって阻害されたことを示しており、RAC1 shRNAによるRAC1の標的化がさらに評価され、髄芽芽腫を治療する潜在的な抗がん戦略として使用されることを示唆しています。

Medulloblastoma is one of the common malignant brain tumors in children or young adults and its overall disease-free 5-year survival rate is approximately 50% due to tumor progression, invasion, and metastasis. This study aimed to determine whether one of Rho GTPases, Rac1 can affect the morphology, motility, and invasion of medulloblastoma cells through knockdown of Rac1 expression. Medulloblastoma Daoy cells were used to manipulate Rac1 expression using Rac1 shRNA, Rac1N17, and Rac1L61 constructs. Reverse transcriptase-PCR and western blot were used to detect expression of Rac1 mRNA and protein, respectively. Invasion and migration assays were performed to assess invasion and migration capacity of Daoy cells, respectively. The data showed that Rac1 mRNA and protein were overexpressed in Daoy cells. Deletion of Rac1 decreased the cross-linked actin network and pseudopodia and also inhibited the number of migration cells migrated or invaded to the other side of the filter compared to control cells. These data indicated that the invasion and migration in Daoy cells were inhibited by deletion of Rac1, and suggest that targeting Rac1 by Rac1 shRNA may further be evaluated and used as a potential anticancer strategy to treat medulloblastoma.