FLAGタグ付きエンベロープタンパク質2を発現するC型肝炎ウイルス2は、変化していない感染性と密度を持ち、FLAG抗体によって特異的に中和され、アフィニティクロマトグラフィーによって精製される可能性があります

超遠心分離によるC型肝炎ウイルス（HCV）精製は、天然および培養ウイルスの低くて不均一な密度のために困難です。最近、Affinity ChromatographyによるHCVのエンベロープタンパク質2（E2）にウイルス浄化を許可することがフラグタグを挿入することが最近示されました。しかし、フラグタグ付きウイルスは劇的に変化し、精製収量は低かった。この研究では、HCV組換えJ6/JFH1のE2のN末端でのFLAGタグの挿入がHUH7.5細胞の生存率に影響を与えず、フラッグタグ付きウイルスには元のウイルスと同様の生理学的特性があることがわかりました。FLAGタグ付きウイルスは、FLAG特異的抗体中和の影響を受けやすく、感染した細胞は抗FLAG抗体によって免疫染色される可能性があります。アンチフラグ樹脂でアフィニティクロマトグラフィーを使用して、感染性粒子の約30％の回収を繰り返し得ました。フラッグタグ付きHCVの完全な生存率と変更されていない生理学的特性は、イメージング、ビリオン組成分析、およびおそらくワクチンの発達にこれらのウイルスを利用するための重要な改善です。

Hepatitis C virus (HCV) purification by ultracentrifugation is difficult because of the low and heterogeneous density of native and cultured viruses. It was recently shown that inserting flag tag into envelope protein 2 (E2) of HCV permitted virus purification by affinity chromatography. However, flag-tagged viruses had drastically altered properties, and purification yield was low. In this study, we found that insertion of flag tag at the N-terminus of E2 in HCV recombinant J6/JFH1 did not affect viability in Huh7.5 cells, and that flag-tagged virus had physiochemical properties similar to the original virus. Flag-tagged virus was susceptible to flag-specific antibody neutralization, and infected cells could be immuno-stained by anti-flag antibodies. Using affinity chromatography with anti-flag resin we repeatedly obtained ~30% recovery of infectious particles. The full viability and unaltered physiochemical properties of flag-tagged HCV is an important improvement for utilizing these viruses for imaging, virion composition analysis and possibly vaccine development.