アスペルギルスnidulans gpda遺伝子のプロモーター領域の機能的要素グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼをコードする

高度に発現したAspergillus nidulans GPDA遺伝子のプロモーター領域の分析について説明します。ATGから上流の1.3 kb領域のヌクレオチド（NT）配列が決定されました。他のアスペルギルスおよびニューロスポラ遺伝子のプロモーター領域との比較により、同様の配列のいくつかの領域が明らかになりました。ランダムと部位特異的変異の両方がGPDA遺伝子のプロモーター領域に導入され、結果として得られる変異体プロモーターが大腸菌LACZ遺伝子に融合しました。構築された融合は、Argb遺伝子座でこれらの融合の1つのコピーを含むA. nidulanと形質転換体に導入されました。ベータガラクトシダーゼアッセイとプライマー伸長実験を使用して、転写活性化と転写開始に関与する配列要素を特定しました。主要な転写開始点（TSP）から上流に約650 ntと250 ntの2つの要素が、転写活性化要素として識別されました。これらの要素は、推定二次構造の領域（直接または反転した反復）と一致します。3番目の要素、主要なTSPから直接上流のC + Tリッチ領域は、転写の正しい開始に関与することが示されました。

Analysis of the promoter region of the highly expressed Aspergillus nidulans gpdA gene is described. The nucleotide (nt) sequence of a 1.3-kb region upstream from the ATG was determined. Comparison with promoter regions of other Aspergillus and Neurospora genes revealed several regions of similar sequence. Both random and site-specific mutations were introduced into the promoter region of the gpdA gene, and the resulting mutant promoters were fused to the Escherichia coli lacZ gene. The constructed fusions were introduced into A. nidulans and transformants that contained one copy of these fusions at the argB locus were analysed. beta-Galactosidase assays and primer extension experiments were used to identify sequence elements involved in transcription activation and transcription initiation. Two elements, located around 650 and 250 nt upstream from the major transcription start point (tsp), were identified as transcription activation elements. These elements coincide with regions of putative secondary structure (direct or inverted repeats). A third element, a C + T-rich region directly upstream from the major tsp, was shown to be involved in correct initiation of transcription.