蛍光検出を使用した高性能液体クロマトグラフィーによるウサギ血漿および眼組織におけるエスクリンの定量化：薬物動態研究への応用

蛍光検出（HPLC-FD）を備えたシンプルで敏感な高性能液体クロマトグラフィー法が、ウサギ血漿および眼組織の低濃度でのエスクリン（AL）の測定について説明しました。内部標準（I.S.）としてメシレート（PM）を使用してメタノールによる脱タンパク化後、窒素の穏やかな流れの下で40°Cで乾燥して上清を蒸発させました。残基を移動相で再構成し、分析のために20μLの体積をHPLCに注入しました。分析物は、究極のXB-C18カラム（250mm×4.6mm i.d.、5μm粒子サイズ）で分離され、ODSガードカラム（10mm×4.0mm i.d.、5μm粒子サイズ）で保護され、水中のアセトニトリル-0.1％トリエチルアミン（調整されたトリエチルアミンを使用して保護されています。フロー率が1.0ml/minの移動相として、リン酸を使用してpH 3.0）（12:88、v/v）。蛍光検出器（FD）の波長は、励起のために344nm、放射の場合は466nmに設定されました。Alの定量（LOQ）の下限（LOQ）は、血漿および硝子体体では0.80ng/ml、水性ユーモアでは1.59ng/ml、虹彩では6.55ng/g、網膜では1.66Ng/gでした。この方法は、Al点眼薬の局所投与後の血漿および眼組織のAL濃度の研究で使用されました。

A simple and sensitive high performance liquid chromatography method with fluorescence detection (HPLC-FD) was described for the determination of aesculin (AL) at low concentrations in rabbit plasma and ocular tissues. After deproteinization by methanol using pazufloxacin mesilate (PM) as an internal standard (I.S.), supernatants were evaporated to dryness at 40°C under a gentle stream of nitrogen. The residue was reconstituted in mobile phase and a volume of 20μL was injected into the HPLC for analysis. Analytes were separated on an Ultimate XB-C18 column (250mm × 4.6mm i.d., 5μm particle size) and protected by a ODS guard column (10mm × 4.0mm i.d., 5μm particle size), using acetonitrile-0.1% triethylamine in water (adjusted to pH 3.0 using phosphoric acid) (12:88, v/v) as mobile phase with a flow rate of 1.0mL/min. The wavelengths of fluorescence detector (FD) were set at 344nm for excitation and 466nm for emission. The lower limit of quantitation (LOQ) for AL was 0.80ng/mL for plasma and vitreous body, 1.59ng/mL for aqueous humor, and 6.55ng/g for iris and 1.66ng/g for retina. The method was used in the study of AL concentrations in plasma and ocular tissues after topical administration of AL eye drops.