細胞の成長と生存率のためのテトラゾリウム色素（MTT）比色アッセイの最適化

MTT比色アッセイは、増殖および細胞毒性研究における生存可能な細胞数を決定する確立された方法です。このアッセイは、ミトコンドリア酵素によって可溶性の青いホルマザン製品を形成する黄色のテトラゾリウム塩の切断に基づいており、生成されたホルマザンの量は、MTT暴露中に存在する死んだ細胞ではなく、死んだ細胞の数に直接比例します。MTTアッセイは迅速で、便利で経済的であるため、培養中の生存細胞の定量化のための非常に人気のある手法になりました。ただし、細胞の代謝やその他の因子に影響を与える可能性のあるさまざまなパラメーターが特定されており、MTT固有の活性を大幅に変更し、誤った高または誤った低細胞数を計算する可能性があります。したがって、アッセイ条件を最適化し、交絡効果を最小限に抑えるために、各細胞株および/または薬物治療の適切なコントロールを備えたアッセイパラメーターを確立することが不可欠です。これらのパラメーターには、適切な細胞密度、培養媒体、MTTの最適な濃度、曝露時間、栄養枯渇を避けるためのアッセイ時の新鮮な培養培地、および細胞の代謝に影響を与える可能性のある薬物治療効果の制御を含める必要があります。これらの重要なパラメーターを制御することにより、MTT比較アッセイは、生存可能な細胞数の正確で信頼できる定量化を提供します。

The MTT colorimetric assay is an established method of determining viable cell number in proliferation and cytotoxicity studies. This assay is based on the cleavage of the yellow tetrazolium salt, MTT, to form a soluble blue formazan product by mitochondrial enzymes, and the amount of formazan produced is directly proportional to the number of living, not dead cells, present during MTT exposure. Since the MTT assay is rapid, convenient, and economical, it has become a very popular technique for quantification of viable cells in culture. However, various parameters have been identified that can affect cellular metabolism and other factors, which significantly modify MTT-specific activity and can result in calculated false high or false low cell counts. Therefore, it is essential to establish assay parameters with the proper controls for each cell line and/or drug treatment in order to optimize assay conditions and minimize confounding effects. These parameters should include determining appropriate cell densities, culture medium, optimal concentrations and exposure times for MTT, fresh culture medium at the time of assay to avoid nutrient depletion, and controlling for drug treatment effects that may influence cellular metabolism. By controlling these important parameters, the MTT colorimetric assay provides accurate and reliable quantification of viable cell number.