前処理DNAを使用した遺伝子置換

相同組換え（HR）による遺伝子置換は、結核菌の病原性における生理学と特定の遺伝子の重要性を理解するための貴重なツールです。また、結核の拡大を防ぐために、候補ワクチンとして合理的に減衰株の発生を可能にします。古典的には、対立遺伝子補充は、標的遺伝子の変異したコピーを運ぶ非複製DNA（自殺プラスミド）の導入を伴い、ほとんどの場合、抗生物質耐性決定要因によって染色体に破壊されます。2つの対立遺伝子間の単一の組換えイベント（クロスオーバー）は、プラスミド全体を統合して、遺伝子の野生型コピーと変異したコピーの両方を運ぶ単一のクロスオーバー（SCO）ひずみを生成します。2つの組換えイベントが発生すると、野生型対立遺伝子が変異対立遺伝子に置き換えられるダブルクロスオーバー（DCO）が生成されます。SCOの株は、2回目の組換えイベントが発生するとDCO株を引き起こす可能性があります（図1）。

Gene replacement by homologous recombination (HR) is an invaluable tool in understanding the physiology and the significance of specific genes in the virulence of Mycobacterium tuberculosis. It will also allow for the development of rationally attenuated strains as candidate vaccines to prevent the spread of tuberculosis. Classically, allelic replacement involves the introduction of nonreplicating DNA (suicide plasmids) carrying a mutated copy of the targeted gene, most often disrupted by an antibiotic resistance determinant, into the chromosome. A single recombination event (cross-over) between the two alleles will result in integration of the entire plasmid to generate a single crossover (SCO) strain carrying both wild-type and mutated copies of the gene. If two recombination events occur, a double cross-over (DCO) is generated where the wild-type allele is replaced by the mutant allele. Strains with an SCO can also give rise to DCO strains when a second recombination event takes place (Fig. 1).