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関心のある遺伝子を発現できる細胞の産生は、遺伝子療法や動物トランスジェネシスを含むバイオメディシンやバイオテクノロジーのさまざまな用途にとって重要です。CRE、FLP、φC31などの部位特異的リコンビナーゼを使用して、ゲノムの正確な位置にトランスジェンを挿入する能力は、トランスジェネシスの効率に大きな利点があります。φC31、R4、TP901-1、およびBXB1ファージのインテグラスに関する最近の研究により、これらのリコンビナーゼが哺乳類細胞の部位特異的組換え触媒を触媒することが示されました。本研究では、哺乳類細胞における部位固有の組換えと遺伝子発現に関するインテグラスの活性を調べました。5つの組換え部位（φC31ATTP、R4 ATTP、TP901-1 ATTP、BXB1 ATTPおよびFRT;マルチ統合HACベクター）とde novo哺乳類コドン最適化インテグラゼを含むヒト人工染色体（HAC）ベクターを設計しました。マルチインテグラースHACベクターには、正確な遺伝子座における遺伝子統合やゲノム位置効果の回避など、いくつかの機能があります。したがって、Integraseの活動を調査するためのプラットフォームとして使用されました。Integraseは、39.3〜96.8％の範囲の周波数でサイト固有の組換えを実行しました。さらに、マルチ統合HACベクターを使用して得られたコロニーの77.3-87.5％で均質な遺伝子発現が観察されました。このベクトルは別の細胞株にも移行でき、この環境で関心のある遺伝子を受け入れることができます。これらのデータは、インテグレーゼが哺乳類細胞におけるDNA組換え効率が高いことを示唆しています。マルチ統合HACベクターにより、導入遺伝子発現細胞を効率的に生成し、遺伝子発現のためのプラットフォーム細胞株を作成できます。
関心のある遺伝子を発現できる細胞の産生は、遺伝子療法や動物トランスジェネシスを含むバイオメディシンやバイオテクノロジーのさまざまな用途にとって重要です。CRE、FLP、φC31などの部位特異的リコンビナーゼを使用して、ゲノムの正確な位置にトランスジェンを挿入する能力は、トランスジェネシスの効率に大きな利点があります。φC31、R4、TP901-1、およびBXB1ファージのインテグラスに関する最近の研究により、これらのリコンビナーゼが哺乳類細胞の部位特異的組換え触媒を触媒することが示されました。本研究では、哺乳類細胞における部位固有の組換えと遺伝子発現に関するインテグラスの活性を調べました。5つの組換え部位（φC31ATTP、R4 ATTP、TP901-1 ATTP、BXB1 ATTPおよびFRT;マルチ統合HACベクター）とde novo哺乳類コドン最適化インテグラゼを含むヒト人工染色体（HAC）ベクターを設計しました。マルチインテグラースHACベクターには、正確な遺伝子座における遺伝子統合やゲノム位置効果の回避など、いくつかの機能があります。したがって、Integraseの活動を調査するためのプラットフォームとして使用されました。Integraseは、39.3〜96.8％の範囲の周波数でサイト固有の組換えを実行しました。さらに、マルチ統合HACベクターを使用して得られたコロニーの77.3-87.5％で均質な遺伝子発現が観察されました。このベクトルは別の細胞株にも移行でき、この環境で関心のある遺伝子を受け入れることができます。これらのデータは、インテグレーゼが哺乳類細胞におけるDNA組換え効率が高いことを示唆しています。マルチ統合HACベクターにより、導入遺伝子発現細胞を効率的に生成し、遺伝子発現のためのプラットフォーム細胞株を作成できます。
The production of cells capable of expressing gene(s) of interest is important for a variety of applications in biomedicine and biotechnology, including gene therapy and animal transgenesis. The ability to insert transgenes at a precise location in the genome, using site-specific recombinases such as Cre, FLP, and ΦC31, has major benefits for the efficiency of transgenesis. Recent work on integrases from ΦC31, R4, TP901-1 and Bxb1 phages demonstrated that these recombinases catalyze site-specific recombination in mammalian cells. In the present study, we examined the activities of integrases on site-specific recombination and gene expression in mammalian cells. We designed a human artificial chromosome (HAC) vector containing five recombination sites (ΦC31 attP, R4 attP, TP901-1 attP, Bxb1 attP and FRT; multi-integrase HAC vector) and de novo mammalian codon-optimized integrases. The multi-integrase HAC vector has several functions, including gene integration in a precise locus and avoiding genomic position effects; therefore, it was used as a platform to investigate integrase activities. Integrases carried out site-specific recombination at frequencies ranging from 39.3-96.8%. Additionally, we observed homogenous gene expression in 77.3-87.5% of colonies obtained using the multi-integrase HAC vector. This vector is also transferable to another cell line, and is capable of accepting genes of interest in this environment. These data suggest that integrases have high DNA recombination efficiencies in mammalian cells. The multi-integrase HAC vector enables us to produce transgene-expressing cells efficiently and create platform cell lines for gene expression.
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