生物発光を使用した感染の全身イメージング

生物発光イメージングは、多数のシステムで生物学的プロセスを視覚化および監視するための強力な手法です。このユニットは、マウスの細菌感染を研究するために使用できる生物発光イメージングの2つの戦略について説明しています。1つの方法は、細菌にルシフェラーゼ遺伝子を発現することです。2番目の方法は、ルシフェラーゼとβ-ラクタマーゼの両方を発現する細菌と、β-ラクタマーゼ加水分解によって放出され、ルシフェラーゼと反応して光を生成する基質を使用することです。両方の戦略について、Ivis Live Animal Imaging System（Caliper Life Sciences）を使用して、生物発光信号が画像化されます。生物発光画像を分析して、生物発光細菌を局在させ、シグナルを定量化し、生成された信号の波長を決定します。細菌数とin vivoでの信号強度の相関を決定することができ、マウスの細菌数の定量的尺度をリアルタイムで可能にします。方法については、ほぼすべての実験システムでこれらの新興技術の適用を成功させるために詳細に説明されています。

Bioluminescence imaging is a powerful technique to visualize and monitor biological processes in numerous systems. This unit describes two strategies for bioluminescence imaging that can be used to study bacterial infection in mice. One method is to express a luciferase gene in the bacteria; the second method is to use bacteria that express both a luciferase and β-lactamase along with a substrate containing caged luciferin, which is released by β-lactamase hydrolysis and reacts with luciferase to generate light. For both strategies, bioluminescent signals are imaged using an IVIS live animal imaging system (Caliper Life Sciences). The bioluminescence images are analyzed to localize bioluminescent bacteria, quantify signal, and determine the wavelengths of the signals produced. The correlation of bacterial numbers with signal intensity in vivo can be determined, allowing a quantitative measure of bacterial numbers in mice in real time. Methods are described in detail to facilitate successful application of these emerging technologies in nearly any experimental system.