組換えタンパク質親和性タグ除去に利用されるプロテアーゼの可変洗剤感度

組換えタンパク質は通常、精製および/または検出を促進するために1つ以上の親和性タグを含みます。アフィニティタグを持つ式コンストラクトには、多くの場合、タグを除去するためのエンジニアリングプロテアーゼ部位が含まれます。他の酵素と同様に、プロテアーゼの活性は緩衝液の条件によって影響を受ける可能性があります。積分膜タンパク質に使用される緩衝液には、タンパク質溶解度を維持するために必要な洗剤が含まれています。94個の個々の洗剤のパネルを使用して、6つの一般的に使用されているプロテアーゼ（エンテロキナーゼ、因子XA、ヒトライノウイルス3Cプロテアーゼ、トバコエッチングウイルスプロテアーゼ、およびトロンビン）の洗剤感度を調べました。トロンビン活性は洗剤のパネル全体に鈍感であったため、膜タンパク質で使用するための最適な選択としてそれを示唆しています。エンテロキナーゼと因子XAは少数の洗剤のみの影響を受け、同様に良い選択をしています。

Recombinant proteins typically include one or more affinity tags to facilitate purification and/or detection. Expression constructs with affinity tags often include an engineered protease site for tag removal. Like other enzymes, the activities of proteases can be affected by buffer conditions. The buffers used for integral membrane proteins contain detergents, which are required to maintain protein solubility. We examined the detergent sensitivity of six commonly-used proteases (enterokinase, factor Xa, human rhinovirus 3C protease, SUMOstar, tobacco etch virus protease, and thrombin) by use of a panel of 94 individual detergents. Thrombin activity was insensitive to the entire panel of detergents, thus suggesting it as the optimal choice for use with membrane proteins. Enterokinase and factor Xa were only affected by a small number of detergents, making them good choices as well.