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サイトカインは、ヒトCD34+細胞のγ-レトロウイルス形質導入に必要です。ただし、サイトカインはCD34+細胞の生着を減らす可能性があり、そのレンチウイルス形質導入には必要ない場合があります。レンチウイルスベクターを使用して、ヒトCD34+細胞の形質導入と生着を最適化しようとしました。ヒト免疫不全ウイルス1型（HIV1）ベースのレンチウイルスベクターを含むヒトCD34+細胞の単一24時間導入幹細胞因子（SCF）、FMS様チロシンキナーゼ3（FLT3）リガンド、トロンボポエチン（それぞれ100 ngML⁻¹）および10％フェタル胎児条件の培地中の培地では、さまざまな胎児条件を比較しました。移植後6か月間、ヒト化された異種移植マウスを使用してアッセイしました。血清を含まない培地は、ヒトCD34+細胞の形質導入効率を改善しました。Interleukin-3（20 ngml⁻¹）は、形質導入効率または生着にほとんど影響を与えませんでした。3倍高いサイトカイン混合物（それぞれ300 ngml⁻¹）は、CD34+細胞の生着を減少させました。SCF単独（100 ngml⁻¹）は、生着能力を維持し、伝達効率の低下に不十分であることが判明しました。短期の事前模倣は、伝達の効率や生着にほとんど影響を与えませんでしたが、24時間のプレイングル化は、より高い形質導入効率、より高い遺伝子発現レベル、および生着の低下を示しました。要約すると、24時間の事前模倣に続いて、SCF、FLT3リガンド、トロンボポエチンを使用した血清を含まない培地における単一の24時間のレンチウイルス形質導入により、ヒトCD34+細胞の拡大に高い形質導入効率が得られ、ヒト臨床遺伝子治療試験に適用できます。
サイトカインは、ヒトCD34+細胞のγ-レトロウイルス形質導入に必要です。ただし、サイトカインはCD34+細胞の生着を減らす可能性があり、そのレンチウイルス形質導入には必要ない場合があります。レンチウイルスベクターを使用して、ヒトCD34+細胞の形質導入と生着を最適化しようとしました。ヒト免疫不全ウイルス1型（HIV1）ベースのレンチウイルスベクターを含むヒトCD34+細胞の単一24時間導入幹細胞因子（SCF）、FMS様チロシンキナーゼ3（FLT3）リガンド、トロンボポエチン（それぞれ100 ngML⁻¹）および10％フェタル胎児条件の培地中の培地では、さまざまな胎児条件を比較しました。移植後6か月間、ヒト化された異種移植マウスを使用してアッセイしました。血清を含まない培地は、ヒトCD34+細胞の形質導入効率を改善しました。Interleukin-3（20 ngml⁻¹）は、形質導入効率または生着にほとんど影響を与えませんでした。3倍高いサイトカイン混合物（それぞれ300 ngml⁻¹）は、CD34+細胞の生着を減少させました。SCF単独（100 ngml⁻¹）は、生着能力を維持し、伝達効率の低下に不十分であることが判明しました。短期の事前模倣は、伝達の効率や生着にほとんど影響を与えませんでしたが、24時間のプレイングル化は、より高い形質導入効率、より高い遺伝子発現レベル、および生着の低下を示しました。要約すると、24時間の事前模倣に続いて、SCF、FLT3リガンド、トロンボポエチンを使用した血清を含まない培地における単一の24時間のレンチウイルス形質導入により、ヒトCD34+細胞の拡大に高い形質導入効率が得られ、ヒト臨床遺伝子治療試験に適用できます。
Cytokines are required for γ-retroviral transduction of human CD34+ cells. However, cytokines may reduce engraftment of CD34+ cells and may not be necessary for their lentiviral transduction. We sought to optimize transduction and engraftment of human CD34+ cells using lentiviral vectors. Single 24 h transduction of human CD34+ cells with human immunodeficiency virus type 1 (HIV1)-based lentiviral vectors in media containing stem cell factor (SCF), FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3) ligand, thrombopoietin (each 100 ng ml⁻¹) and 10% fetal bovine serum was compared with various cytokine conditions during ex vivo culture and assayed using humanized xenograft mice for 6 months after transplantation. Serum-free media improved transduction efficiency of human CD34+ cells. Interleukin-3 (20 ng ml⁻¹) had little effect on transduction efficiency or engraftment. Threefold higher cytokine mixture (each 300 ng ml⁻¹) reduced engraftment of CD34+ cells. SCF alone (100 ng ml⁻¹) proved insufficient for maintaining engraftment ability and reduced transduction efficiency. Short-term prestimulation had little effect on transduction efficiency or engraftment, yet 24 h prestimulation showed higher transduction efficiency, higher gene expression levels and lower engraftment. In summary, 24 h prestimulation followed by single 24-h lentiviral transduction in serum-free media with SCF, FLT3 ligand and thrombopoietin yields high transduction efficiency to engrafting human CD34+ cells, and is applicable in human clinical gene therapy trials.
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