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背景：皮膚への環境および内因性ストレスは、皮膚がん、未熟老化、慢性炎症の原因となる理由と考えられています。予防的および/または治療的特性を伴う物質のスクリーニングは、現在、皮膚細胞培養におけるストレス誘発反応に対する効果の機構的研究に基づいています。 目的：培養正常なヒト表皮ケラチノサイト（NHEK）および不滅のHACAT細胞における、構成的、UVA、LPS、またはTNF-α誘発性炎症反応に対する植物ポリフェノール（PPS）の効果を比較しました。 方法：PPS、フラボノイド、スチルベノイド、フェニルプロパノイドの3つのクラスの代表者が研究されました。mRNAに対するそれらの影響は、QRT-PCRによって決定されました。タンパク質の発現は、ウエスタンブロットとバイオプレキサードELISAによってアッセイされました。AKT1、ERK1/2、EGFR、およびNFKAPPABのリン酸化は、細胞内ELISAまたはウエスタンブロットによって定量化されました。 結果：PPSまたはUVAまたはLPSとの組み合わせにより、HACATではストレス応答の強力なアップレギュレーションが誘導されましたが、NHEKではそうではありませんでした。さらに、NHEKと比較して、HACATは、NFKAPPABの活性化が強いことを伴うMCP-1、IP-10、およびIL-8のより高い合成でTNF-alphaに応答しました。PPSは、NFKAPPAB、AKT1、ERK、およびEGFRの活性化に異なる影響を及ぼしますが、両方の細胞タイプからのケモカイン放出をダウンレギュレートしました。 結論：HACATを使用して得られた薬理学的スクリーニングの結果は、ヒト表皮からの原発性ケラチノサイトに拡張しながら慎重に考慮する必要があります。
背景：皮膚への環境および内因性ストレスは、皮膚がん、未熟老化、慢性炎症の原因となる理由と考えられています。予防的および/または治療的特性を伴う物質のスクリーニングは、現在、皮膚細胞培養におけるストレス誘発反応に対する効果の機構的研究に基づいています。 目的：培養正常なヒト表皮ケラチノサイト（NHEK）および不滅のHACAT細胞における、構成的、UVA、LPS、またはTNF-α誘発性炎症反応に対する植物ポリフェノール（PPS）の効果を比較しました。 方法：PPS、フラボノイド、スチルベノイド、フェニルプロパノイドの3つのクラスの代表者が研究されました。mRNAに対するそれらの影響は、QRT-PCRによって決定されました。タンパク質の発現は、ウエスタンブロットとバイオプレキサードELISAによってアッセイされました。AKT1、ERK1/2、EGFR、およびNFKAPPABのリン酸化は、細胞内ELISAまたはウエスタンブロットによって定量化されました。 結果：PPSまたはUVAまたはLPSとの組み合わせにより、HACATではストレス応答の強力なアップレギュレーションが誘導されましたが、NHEKではそうではありませんでした。さらに、NHEKと比較して、HACATは、NFKAPPABの活性化が強いことを伴うMCP-1、IP-10、およびIL-8のより高い合成でTNF-alphaに応答しました。PPSは、NFKAPPAB、AKT1、ERK、およびEGFRの活性化に異なる影響を及ぼしますが、両方の細胞タイプからのケモカイン放出をダウンレギュレートしました。 結論：HACATを使用して得られた薬理学的スクリーニングの結果は、ヒト表皮からの原発性ケラチノサイトに拡張しながら慎重に考慮する必要があります。
BACKGROUND: Environmental and endogenous stresses to skin are considered causative reasons for skin cancers, premature ageing, and chronic inflammation. Screening of substances with preventive and/or curative properties is currently based on mechanistic studies of their effects towards stress-induced responses in skin cell cultures. OBJECTIVE: We compared effects of plant polyphenols (PPs) on the constitutive, UVA-, LPS-, or TNF-alpha-induced inflammatory responses in cultured normal human epidermal keratinocytes (NHEK) and immortalized HaCaT cells. METHODS: Representatives of three classes of PPs, flavonoids, stilbenoids, and phenylpropanoids were studied. Their effects on mRNA were determined by qRT-PCR; protein expression was assayed by Western blot and bioplexed ELISA; phosphorylation of Akt1, ERK1/2, EGFR, and NFkappaB was quantified by intracellular ELISA or Western blot. RESULTS: PPs or their combination with UVA or LPS induced strong up-regulation of stress responses in HaCaT but not in NHEK. In addition, compared to NHEK, HaCaT responded to TNF-alpha with higher synthesis of MCP-1, IP-10 and IL-8, concomitant with stronger NFkappaB activation. PPs down-regulated the chemokine release from both cell types, although with distinct effects on NFkappaB, Akt1, ERK, and EGFR activation. CONCLUSION: Results of pharmacological screenings obtained by using HaCaT should be cautiously considered while extending them to primary keratinocytes from human epidermis.
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