ヒトF11R遺伝子の転写と翻訳は、炎症性サイトカインによって誘発されるアテローム発生の初期ステップに必要です

背景：F11受容体（F11R;別名JAM-A、JAM-1）は、循環血小板の膜表面に構成的に存在し、内皮細胞（EC）の密着結合内に存在する細胞接着タンパク質です。以前の報告では、炎症誘発性サイトカインへのECの曝露により、ECSの管腔面へのF11R分子の挿入が原因であり、血小板とECのF11R分子間の相同作用が発生し、炎症を起こしたECSへの血小板の接着が生じることが実証されました。本報告書の主な新たな発見は、この一連のイベントの最初のステップは、炎症性サイトカインへの暴露によってECSで誘導されるF11R分子のde-novo転写と翻訳であるということです。 方法：実験的アプローチでは、分離された洗浄されたヒト血小板懸濁液と培養されたヒト静脈内皮細胞（HUVEC）およびヒト炎症性サイトカインTNF-alphaおよび/またはIFN-Gammaにさらされたヒト動脈内皮細胞（HAEC）を使用して、ヒト系の能力を調べるためにf1を介して炎症を起こします。私たちの戦略は、この活性に対する以下の阻害剤の効果のテストに基づいていました：一般的なmRNA合成阻害剤、NF-カッパブおよびJAK/STAT経路の阻害剤、およびF11R遺伝子を特異的に沈黙させるための小さな干渉F11R-MRNA（SIRNA）。 結果：炎症を起こしたECの治療は、阻害剤アクチノマイシン、パルテノリド、またはAG-480での治療により、F11R-mRNA発現の完全な遮断をもたらし、この誘導におけるNF-KAPPABおよびJAK/STAT経路の関与を示しています。F11R siRNAを使用したECのトランスフェクションにより、サイトカイン誘発性のF11R mRNAのアップレギュレーションの完全な阻害と、サイトカイン炎症ECSにおける新しく翻訳されたF11R分子の検出の阻害が生じました。F11R転写と翻訳の阻害の機能的結果は、炎症を起こしたECに対するヒト血小板の接着の重要な遮断でした。 結論：これらの結果は、血小板の炎症を起こしたECSへの接着にECSにおけるF11Rのde novo合成が必要であることを証明しています。炎症を起こした内皮への血小板の接着は、除去されていない血管におけるプラーク形成にとって重要であるため、F11Rのde-novo翻訳は、アテローム性発生の開始における重要な初期段階であり、アテローム性動脈硬化、心臓発作、脳卒中につながると結論付けます。

BACKGROUND: The F11 Receptor (F11R; aka JAM-A, JAM-1) is a cell adhesion protein present constitutively on the membrane surface of circulating platelets and within tight junctions of endothelial cells (ECs). Previous reports demonstrated that exposure of ECs to pro-inflammatory cytokines causes insertion of F11R molecules into the luminal surface of ECs, ensuing with homologous interactions between F11R molecules of platelets and ECs, and a resultant adhesion of platelets to the inflamed ECs. The main new finding of the present report is that the first step in this chain of events is the de-novo transcription and translation of F11R molecules, induced in ECs by exposure to inflammatory cytokines. METHODS: The experimental approach utilized isolated, washed human platelet suspensions and cultured human venous endothelial cells (HUVEC) and human arterial endothelial cells (HAEC) exposed to the proinflammatory cytokines TNF-alpha and/or IFN-gamma, for examination of the ability of human platelets to adhere to the inflamed ECs thru the F11R. Our strategy was based on testing the effects of the following inhibitors on this activity: general mRNA synthesis inhibitors, inhibitors of the NF-kappaB and JAK/STAT pathways, and small interfering F11R-mRNA (siRNAs) to specifically silence the F11R gene. RESULTS: Treatment of inflamed ECs with the inhibitors actinomycin, parthenolide or with AG-480 resulted in complete blockade of F11R- mRNA expression, indicating the involvement of NF-kappaB and JAK/STAT pathways in this induction. Transfection of ECs with F11R siRNAs caused complete inhibition of the cytokine-induced upregulation of F11R mRNA and inhibition of detection of the newly- translated F11R molecules in cytokine-inflamed ECs. The functional consequence of the inhibition of F11R transcription and translation was the significant blockade of the adhesion of human platelets to inflamed ECs. CONCLUSION: These results prove that de novo synthesis of F11R in ECs is required for the adhesion of platelets to inflamed ECs. Because platelet adhesion to an inflamed endothelium is crucial for plaque formation in non-denuded blood vessels, we conclude that the de-novo translation of F11R is a crucial early step in the initiation of atherogenesis, leading to atherosclerosis, heart attacks and stroke.