プロテインキナーゼのEPH/ELKファミリーにおける上皮細胞受容体タンパク質 - チロシンキナーゼであるECKのcDNAクローンと特性評価

ヒト上皮（HELA）cDNAライブラリーは、タンパク質 - チロシンキナーゼの高度に保存された領域にハイブリダイズするように設計された縮退したオリゴヌクレオチドでスクリーニングされました。このスクリーンからの1つのcDNAは、推定タンパク質 - チロシンキナーゼ触媒ドメインを含むことが示され、その後、976-アミノ酸ポリペプチドのコーディング領域全体を含むヒトケラチノサイトライブラリーから別のcDNAを分離するために使用されました。予測されたタンパク質は、推定N末端シグナルペプチド、膜貫通ドメイン、および標準的なタンパク質 - チロシンキナーゼ触媒ドメインを含む418アミノ酸の細胞質ドメインを持つ534アミノ酸の外部ドメインを持っています。分子系統発生は、このプロテインキナーゼがEPHとELKと密接に関連しており、この受容体ファミリーは他の受容体タンパク質 - チロシンキナーゼよりも非受容体タンパク質 - チロシンキナーゼファミリーにより密接に関連していることを示しています。TRPE融合タンパク質免疫沈降に対する抗体は、免疫複合キナーゼアッセイでチロシンでリン酸化される130 kDaタンパク質を沈殿させました。13の成体ラット臓器からのRNAの分析により、ECK遺伝子は、皮膚、腸、肺、卵巣などの上皮細胞の高い割合を含む組織で最も高度に発現することが示されました。上皮起源のいくつかの細胞株は、タンパク質およびRNAレベルでECKプロテインキナーゼを発現することがわかった。いくつかのラット臓器の免疫組織化学分析も上皮細胞の染色を示しました。これらの観察により、上皮細胞キナーゼのために、このプロテインキナーゼECKという名前を挙げました。

A human epithelial (HeLa) cDNA library was screened with degenerate oligonucleotides designed to hybridize to highly conserved regions of protein-tyrosine kinases. One cDNA from this screen was shown to contain a putative protein-tyrosine kinase catalytic domain and subsequently used to isolate another cDNA from a human keratinocyte library that encompasses the entire coding region of a 976-amino-acid polypeptide. The predicted protein has an external domain of 534 amino acids with a presumptive N-terminal signal peptide, a transmembrane domain, and a cytoplasmic domain of 418 amino acids that includes a canonical protein-tyrosine kinase catalytic domain. Molecular phylogeny indicates that this protein kinase is closely related to eph and elk and that this receptor family is more closely related to the non-receptor protein-tyrosine kinase families than to other receptor protein-tyrosine kinases. Antibodies raised against a TrpE fusion protein immunoprecipitated a 130-kDa protein that became phosphorylated on tyrosine in immune complex kinase assays, indicating that this protein is a bona fide protein-tyrosine kinase. Analysis of RNA from 13 adult rat organs showed that the eck gene is expressed most highly in tissues that contain a high proportion of epithelial cells, e.g., skin, intestine, lung, and ovary. Several cell lines of epithelial origin were found to express the eck protein kinase at the protein and RNA levels. Immunohistochemical analysis of several rat organs also showed staining in epithelial cells. These observations prompted us to name this protein kinase eck, for epithelial cell kinase.