ラット血漿および肝細胞株培地における5-オキソプロリン（ピログルタミン酸）の定量分析のためのHPLC-MS/MSメソッド

5-オキソプロリン（5-OP;ピログルタミン酸）は、内因性トリュプタイドグルタチオンの生合成の中間体であり、グルタチオン脱脱毛症の肝臓毒性の異物剤の投与後のラットのバイオフライドおよび組織で、アセトミノファン（パラカチャティティックス）のように上昇することが見られています。、ブロモベンゼンとエチオニン。5-OPは肝毒性の潜在的なバイオマーカーであるため、in vitro細胞培養培地およびラット血漿での定量化のためにHPLC-MS/MSメソッドが開発されました。細胞培養媒体の場合、キャリブレーション曲線の最低濃度として定義される定量化の下限（LLOQ）は10 ng/mLでした。注射の間の細胞培養培地で最小限のキャリーオーバーが観察されました（検査したすべての濃度で5％未満）、精度と精度は一般に、内および日分析の20％よりも優れていました。ラット血漿の場合、50 ng/mLのLLOQが得られました。プラズマのキャリーオーバーは、すべての濃度で5％未満でした。バッチの精度と精度の間では、一般に20％よりも優れていました。メソッドは、LLOQから1μg/mLまでの両方のサンプルタイプの線形でした。ヘパトトキシンメタピリレンの慢性投与にさらされたラットから得られたサンプルの場合、5-OPの濃度は、コントロールと比較してどの時点でも有意に増加することが観察されませんでした。5-OPは、シトクロムP450 2E1（THLE-2E1）をトランスフェクトしたヒト肝臓上皮（THLE）細胞の培地でも決定されました。アセトアミノフェンへのTHLE-2E1細胞の曝露後、5-OPの濃度の大幅な増加が観察され、これは細胞グルタチオン含有量の減少および細胞毒性と相関していました。これらの結果は、LC-MS/MSを使用して、in vivoおよびin vitroで5-OPの迅速、敏感で定量的な決定を実行できることを示しており、肝臓薬物誘導のバイオマーカーとして5-OPの有用性を追加の調査を可能にすることを示しています。肝臓損傷。

5-Oxoproline (5-OP; pyroglutamate) is an intermediate in the biosynthesis of the endogenous tripeptide glutathione and has been seen to be elevated in the biofluids and tissues of rats following the administration of glutathione-depleting hepatotoxic xenobiotics such as acetaminophen (paracetamol), bromobenzene and ethionine. As 5-OP is a potential biomarker for hepatotoxicity HPLC-MS/MS methods have been developed for its quantification in in vitro cell culture media and rat plasma. For the cell culture media the lower limit of quantification (LLOQ), defined as the lowest concentration on the calibration curve, was 10 ng/ml. Minimal carry over was observed for cell culture media between injections (less than 5% at all concentrations examined), precision and accuracy were generally better than 20% for within and between day analyses. For rat plasma a LLOQ of 50 ng/ml was obtained. Carry over for plasma was less than 5% for all concentrations, within and between batch accuracy and precision were generally better than 20%. The methods were linear for both sample types from the LLOQ up to 1 μg/ml. For samples obtained from rats subjected to chronic administration of the hepatotoxin methapyrilene, concentrations of 5-OP were not observed to increase significantly at any time point compared to controls. 5-OP was also determined in the culture media of human liver epithelial (THLE) cells transfected with cytochrome P450 2E1 (THLE-2E1). Following exposure of THLE-2E1 cells to acetaminophen, large increases in the concentrations of 5-OP were observed, which correlated with reduced cellular glutathione content and with cell toxicity. These results show that LC-MS/MS can be used to perform rapid, sensitive, and quantitative determination of 5-OP in vivo and in vitro and will enable additional investigations into the utility of 5-OP as a biomarker of liver drug-induced liver injury.