シロスタゾールは、CCR2遺伝子発現を阻害することにより、MCP-1誘発性走化性とTHP-1単球の接着を減少させます

初期のアテローム性動脈硬化症の損傷した内皮への単球の走化性と接着は重要です。特定のホスホジエステラーゼ型III阻害剤であるシロスタゾールは、さまざまなメカニズムによって媒介される抗アテローム性動脈硬化効果を示すことが知られています。この研究の目的は、MCP-1誘発性走化性と単球の接着に対するシロスタゾールの調節効果を調査することを目的としています。THP-1単球におけるMCP-1の主要受容体であるCCR2の遺伝子発現も分析されました。MCP-1に対する単球の走化性は、トランスウェルフィルターアッセイを使用して調査されました。シロスタゾールは、cAMP依存性であることが示された単球のMCP-1誘発性走化性を用量依存的に阻害しました。ウエスタンブロット分析とフローサイトメトリー法を使用して、シロスタゾール処理による単球の細胞膜でのCCR2タンパク質の減少を実証しました。RT/リアルタイムPCRの結果により、CAMPによって媒介されたシロスタゾールによるCCR2 mRNA発現の減少が確認されました。同様の阻害は、ヒト末梢単球でも認められました。P44/42およびP38 MAPKを含むCCR2後のシグナル伝達経路は、ウエスタンブロット分析によって検査されました。結果は、MCP-1刺激後のp44/42およびp38 MAPKのリン酸化に対するシロスタゾールの阻害効果を確認しました。MCP-1治療後の単球の活性化は、シロスタゾールによって用量依存的に抑制された血管内皮細胞への接着の強化を示しました。一緒に、シロスタゾールは、CCR2遺伝子発現とMCP-1誘発性走化性と単球の接着を阻害することを初めて実証しました。本研究は、シロスタゾールの抗アテロスクレート効果の根底にある追加の分子メカニズムを提供します。

The chemotaxis and adhesion of monocytes to the injured endothelium in the early atherosclerosis is important. Cilostazol, a specific phosphodiesterase type III inhibitor, is known to exhibit anti-atherosclerotic effects mediated by different mechanisms. This study aimed to investigate the modulating effect of cilostazol on the MCP-1-induced chemotaxis and adhesion of monocytes. The gene expression of CCR2, the major receptor of MCP-1 in THP-1 monocytes, was also analyzed. The chemotaxis of monocytes toward MCP-1 was investigated using the transwell filter assay. Cilostazol dose-dependently inhibited the MCP-1-induced chemotaxis of monocytes which was shown to be cAMP-dependent. Using western blot analysis and flow cytometry method, we demonstrated the decrease of CCR2 protein at the cell membrane of monocytes by cilostazol treatment. Results from RT/real-time PCR confirmed the decrease of CCR2 mRNA expression by cilostazol which was also mediated by cAMP. Similar inhibition was also noted in human peripheral monocytes. The post-CCR2 signaling pathways including p44/42 and p38 MAPK were examined by western blot analysis. Result confirmed the inhibitory effect of cilostazol on the phosphorylation of p44/42 and p38 MAPK after MCP-1 stimulation. The activation of monocytes after MCP-1 treatment exhibited enhanced adhesion to vascular endothelial cells which was dose-dependently suppressed by cilostazol. Together, cilostazol was demonstrated, for the first time, to inhibit the CCR2 gene expression and MCP-1-induced chemotaxis and adhesion of monocytes which might therefore reduce the infiltration of monocytes during the early atherosclerosis. The present study provides an additional molecular mechanism underlying the anti-atherosclerotic effects of cilostazol.