マウス下垂体甲状腺刺激剤放出ホルモン受容体をコードするcDNAの発現クローニング

甲状腺刺激ホルモン（TRH）は、下垂体前葉の放出因子として、および中枢神経系および末梢神経系の神経伝達物質/神経拡張器として機能する重要な細胞外調節分子です。TRHの結合部位はこれらの組織に存在しますが、TRH受容体（TRH-R）はどの源からも精製されていません。発現クローン化戦略でアフェノパスlaevis卵母細胞を使用して、マウス下垂体TRH-RをコードするcDNAクローンを分離しました。この結論は、次の証拠に基づいています。このcDNAからアフリカツメガエル卵母細胞にin vitroで転写された感覚RNAの注入は、TRHと競合拮抗薬クロルディアゼポキシドを適切な親和性と結合する細胞表面受容体の発現につながり、適切な濃度依存性を伴うTRHに対する電気生理学的応答を誘発します。アンチセンスRNAは、正常なラット前部下垂体から分離されたRNAを注入したアフリカアキセノパス卵母細胞のTRH応答を阻害します。最後に、CoS-1細胞のこのcDNAのトランスフェクションは、TRHとクロルディアゼポキシドを適切な親和性と結合し、イノシトールリン酸形成のTRH刺激を導入する受容体の発現につながります。3.8キロ塩のマウスTRH-R cDNAは、他のグアニンヌクレオチド結合タンパク質共役受容体と類似性を示す393アミノ酸のタンパク質をコードします。

Thyrotropin-releasing hormone (TRH) is an important extracellular regulatory molecule that functions as a releasing factor in the anterior pituitary gland and as a neurotransmitter/neuromodulator in the central and peripheral nervous systems. Binding sites for TRH are present in these tissues, but the TRH receptor (TRH-R) has not been purified from any source. Using Xenopus laevis oocytes in an expression cloning strategy, we have isolated a cDNA clone that encodes the mouse pituitary TRH-R. This conclusion is based on the following evidence. Injection of sense RNA transcribed in vitro from this cDNA into Xenopus oocytes leads to expression of cell-surface receptors that bind TRH and the competitive antagonist chlordiazepoxide with appropriate affinities and that elicit electrophysiological responses to TRH with the appropriate concentration dependency. Antisense RNA inhibits the TRH response in Xenopus oocytes injected with RNA isolated from normal rat anterior pituitary glands. Finally, transfection of COS-1 cells with this cDNA leads to expression of receptors that bind TRH and chlordiazepoxide with appropriate affinities and that transduce TRH stimulation of inositol phosphate formation. The 3.8-kilobase mouse TRH-R cDNA encodes a protein of 393 amino acids that shows similarities to other guanine nucleotide-binding regulatory protein-coupled receptors.