2-メトキシエストラジオールは、p38 MAPK活性化を介してヒト網膜芽細胞腫細胞におけるBAXリン酸化とアポトーシスを誘導しました

網膜芽細胞腫（RB）は、米国だけで毎年約300人の子供に影響を与える一般的な小児期の眼内癌です。核エストロゲン受容体に結合しない17-β-エストラジオールの内因性代謝物である2-メトキシエストラジオール（2me）は、急速に成長する腫瘍細胞に対して強力なアポトーシス活性を示します。ここでは、アポトーシスの2ME誘導が、RB細胞株で10 µM 2MEとの48時間のインキュベーション後に早期断片化されたDNAによって実証されたことを報告します。その後、増殖の減少が時間的および用量依存的に観察されました。メカニズムのさらなる分析は、ERKも同じ条件下で2MEで活性化されたにもかかわらず、p38キナーゼがY79細胞の2ME誘発アポトーシスで重要な役割を果たすことを示しています。p38キナーゼの活性化は、2meの6時間の処理後にThr（167）で誘導された2me誘導BAXリン酸化を媒介し、Bcl-2-Baxヘテロダイマーの形成を防ぎます。P38特異的阻害剤、SB 203580、または特定のsiRNAによるp38ノックダウンの両方が、BAXリン酸化の2ME誘導をブロックしました。さらに、Bax S163Aではなく、一時的にトランスフェクトされた変異体BAXT167Aのみが2ME誘発アポトーシスを阻害しました。要約すると、我々のデータは、2MEがP38マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MAPK）のリン酸化を引き起こすことにより、ヒトRB細胞のアポトーシスを誘導することを示唆しており、これはBAXのリンと相関していると思われます。2MEの能力を理解することは、RBにアポトーシスを誘導することにより、有望な治療候補としてそれを開発するのに役立つかもしれません。

Retinoblastoma (Rb) is a common childhood intraocular cancer that affects approximately 300 children each year in the United States alone. 2-Methoxyestradiol (2ME), an endogenous metabolite of 17-β-estradiol that dose not bind to nuclear estrogen receptor, exhibits potent apoptotic activity against rapidly growing tumor cells. Here, we report that 2ME induction of apoptosis was demonstrated by early fragmented DNA after 48 h of incubation with 10 µM 2ME in Rb cell lines. Subsequently, a decrease of proliferation was observed in a time- and dose-dependent manner. Further analysis of the mechanism indicates that p38 kinase plays a critical role in 2ME-induced apoptosis in Y79 cells, even though ERK was also activated by 2ME under the same conditions. Activation of p38 kinase also mediates 2ME induced Bax phosphorylated at Thr(167) after a 6 h treatment of 2ME, which in turn prevents formation of the Bcl-2-Bax heterodimer. Both p38 specific inhibitor, SB 203580, or p38 knockdown by specific siRNA, blocked 2ME induction of Bax phosphorylation. Furthermore, only transiently transfected mutant BaxT167A, but not Bax S163A, inhibited 2ME-induced apoptosis. In summary, our data suggest that 2ME induces apoptosis in human Rb cells by causing phosphorylation of p38 Mitogen-activated protein kinase (MAPK), which appears to be correlated with phosphorlation of Bax. This understanding of 2ME's ability may help develop it as a promising therapeutic candidate by inducing apoptosis in a Rb.