HMG COAレダクターゼのRNAiを介したノックダウンは、in vivoの生理学的に調節された低密度リポタンパク質受容体治療ベクターからの遺伝子発現を促進します

治療ベクターから遺伝子発現を強化するための新しい戦略の開発は、補完遺伝子治療に有利であることが証明される可能性があります。これは、適切な遺伝子調節が治療効果を高める可能性がある場合、家族性高コレステロール血症（FH）を治療するために、低密度リポタンパク質受容体（LDLR）遺伝子の治療的発現に適用されます。LDLRゲノムDNA発現ベクターは、プラバスタチンによってin vivoで調節できることを以前に報告しました。現在の研究では、LDLR送達と併せてメバロン酸経路の標的ノックダウンがLDLR導入遺伝子発現の強化と表現型の回復の改善につながるかどうかを調査しました。ここでは、小さな干渉RNA（siRNA）を使用してHMG COAレダクターゼ（HMGCR）のノックダウン（HMGCR）のノックダウンにより、マウスおよびヒト細胞のin vitroでのLDL粒子の結合と内部化の有意な増加をもたらしたことを実証しました。siRNAまたはmicroRNA（miRNA）発現ベクターを使用したLDLRプロモータールシフェラーゼ発現プラスミドのin vivo共噴射hMGCRは、ルシフェラーゼ発現の少なくとも10倍の増加をもたらしました。PLDLR-LDLR発現プラスミドを含むLDLR（ - / - ）マウスの注入により、プラスミドLDLコレステロールが大幅に減少しました。これは、マウスHMGCRを標的とするmiRNA発現ベクターとの共噴射によりさらに強化されました。私たちのデータは、HMGCRの標的ノックダウンがFHの遺伝子治療結果を強化する可能性があることを示唆しています。

The development of novel strategies to enhance gene expression from therapeutic vectors may prove advantageous for complementation gene therapy. This applies to therapeutic expression of the low-density lipoprotein receptor (LDLR) gene to treat familial hypercholesterolaemia (FH), where appropriate gene regulation could enhance therapeutic effect. We have previously reported that LDLR genomic DNA expression vectors can be regulated in vivo by pravastatin. In the current study, we investigated whether targeted knockdown of the mevalonate pathway in conjunction with LDLR delivery would lead to enhanced LDLR transgene expression and improved phenotype recovery. We demonstrated here that knockdown of HMG CoA reductase (HMGCR) by up to 70% using small interfering RNAs (siRNAs) led to a significant increase in binding and internalisation of LDL particles in vitro in mouse and human cells. In vivo co-injection of LDLR promoter luciferase expression plasmids with siRNAs or microRNA (miRNA) expression vectors targeting mouse Hmgcr led to at least a 10-fold increase in luciferase expression. Injection of Ldlr(-/-) mice with pLDLR-LDLR expression plasmids led to a significant reduction in plasmid LDL cholesterol, which was further enhanced by co-injection with miRNA expression vectors targeted to mouse Hmgcr. Our data suggest that targeted knockdown of HMGCR may enhance gene therapy outcomes for FH.