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SIMIANウイルス40の大きなT抗原（SVLT）は、哺乳類細胞内のSV40起源（SV40 ORI）を持つプラスミドの複製を誘導します。内部リボソーム侵入部位（IRES）は、1つのポリシストリックmRNAからのタンパク質のコトランスル化を可能にする要素です。これらの要素の組み合わせにより、SV40 ORIを持つプラスミド上の、関心のタンパク質とSVLTのIRE依存性共発現とSVLTが構成的または調節され、陽性のフィードバックループが生成され、発現が強化されます。赤蛍光タンパク質（RFP）をIRES-SVLT要素にリンクするベクターは、この要素を欠いているベクターから実証されたもので蛍光を〜10倍増加させます。トランスフェクション耐性CV-1細胞では、RFP-ARES-SVLTベクターは、RFPの検出可能なレベルを発現する細胞の数を大幅に増加させます。さらに、標準のルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子コンストラクトと関連エフェクターにIRES-SVLT/SV40 ORI要素を含めると、β-カテニン/TCF経路とモデルとしての哺乳類の2ハイブリッドアッセイを使用して、発光出力と感度の著しい増加が生じます。。最終的に、これらの十分に確立された要素（IRES-SVLT/SV40 ORI）を組み合わせたベクターシステムは、組換えタンパク質の産生、トランスフェクション耐性細胞株の使用、およびルシフェラーゼベースの高性化の有効性のための過渡性トランスフェクションの有用性を高め、スループットスクリーニングアッセイ。
SIMIANウイルス40の大きなT抗原（SVLT）は、哺乳類細胞内のSV40起源（SV40 ORI）を持つプラスミドの複製を誘導します。内部リボソーム侵入部位（IRES）は、1つのポリシストリックmRNAからのタンパク質のコトランスル化を可能にする要素です。これらの要素の組み合わせにより、SV40 ORIを持つプラスミド上の、関心のタンパク質とSVLTのIRE依存性共発現とSVLTが構成的または調節され、陽性のフィードバックループが生成され、発現が強化されます。赤蛍光タンパク質（RFP）をIRES-SVLT要素にリンクするベクターは、この要素を欠いているベクターから実証されたもので蛍光を〜10倍増加させます。トランスフェクション耐性CV-1細胞では、RFP-ARES-SVLTベクターは、RFPの検出可能なレベルを発現する細胞の数を大幅に増加させます。さらに、標準のルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子コンストラクトと関連エフェクターにIRES-SVLT/SV40 ORI要素を含めると、β-カテニン/TCF経路とモデルとしての哺乳類の2ハイブリッドアッセイを使用して、発光出力と感度の著しい増加が生じます。。最終的に、これらの十分に確立された要素（IRES-SVLT/SV40 ORI）を組み合わせたベクターシステムは、組換えタンパク質の産生、トランスフェクション耐性細胞株の使用、およびルシフェラーゼベースの高性化の有効性のための過渡性トランスフェクションの有用性を高め、スループットスクリーニングアッセイ。
The simian virus 40 large T antigen (SVLT) induces replication of plasmids bearing the SV40 origin of replication (SV40 ori) within mammalian cells. The internal ribosomal entry site (IRES) is an element that allows for the cotranslation of proteins from one polycistronic mRNA. Through the combination of these elements, IRES-dependent coexpression of a protein of interest and the SVLT, either constitutive or regulated, on plasmids bearing the SV40 ori generates a positive feedback loop, resulting in enhanced expression. A vector linking red fluorescent protein (RFP) to the IRES-SVLT element enhances fluorescence ~10-fold over that demonstrated from a vector lacking this element. In transfection-resistant CV-1 cells, the RFP-IRES-SVLT vector substantially increases the number of cells expressing detectable levels of RFP. Furthermore, inclusion of the IRES-SVLT/SV40 ori elements in standard luciferase-based reporter gene constructs and associated effectors results in marked increases in luminescent output and sensitivity, using the β-catenin/TCF pathway and the mammalian two-hybrid assay as models. Ultimately, vector systems combining these well-established elements (IRES-SVLT/SV40 ori) will increase the utility of transient transfection for the production of recombinant proteins, the use of transfection-resistant cell lines, and the effectiveness of luciferase-based high-throughput screening assays.
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