脱分化された細胞の選択されたクローンから始まる肥大性軟骨細胞のin vitroの発達

酵素的に解離したニワトリ胚脛骨からの単一の細胞は、新鮮または条件付き培地でクローン化され、拡張されています。約13％のクローニング効率は、脱分化された軟骨細胞によって条件付けられた媒体を使用して得られました。肥大性軟骨細胞から条件付けられた培地が使用されたときに1.4％のクローニング効率が得られ、J2-3T3マウス線維芽細胞によって新鮮な培地または培地で本質的に0の効率が見つかりました。細胞クローンは形態学的基準によって選択され、脱分化された表現型（線維芽細胞様）を示すクローンがさらに特徴付けられました。分析された38のクローンのうち、17は肥大性軟骨細胞段階と区別し、適切な培養条件に置かれたときに肥大性軟骨を再構成することができました。これらのクローンの細胞は、軟骨細胞分化の典型的なマーカー、すなわち、II型と型Xコラーゲンを発現しました。分化を受けていないクローンは、タイプIコラーゲンのみを表現し続けました。分化クローンからの肥大性軟骨細胞は、免疫蛍光により単一細胞レベルで分析されました。すべての細胞はX型コラーゲンに対して陽性でしたが、それらの約50％はII型コラーゲンに対して陽性を示しました。

Single cells from enzymatically dissociated chick embryo tibiae have been cloned and expanded in fresh or conditioned culture media. A cloning efficiency of approximately 13% was obtained using medium conditioned by dedifferentiated chondrocytes. A cloning efficiency of only 1.4% was obtained when conditioned medium from hypertrophic chondrocytes was used, and efficiencies of essentially 0 were found with fresh medium or medium conditioned by J2-3T3 mouse fibroblasts. Cell clones were selected by morphological criteria and clones showing a dedifferentiated phenotype (fibroblast-like) were further characterized. Out of 38 clones analyzed, 17 were able to differentiate to the hypertrophic chondrocyte stage and reconstitute hypertrophic cartilage when placed in the appropriate culture conditions. Cells from these clones expressed the typical markers of chondrocyte differentiation, i.e., type II and type X collagens. Clones not undergoing differentiation continued to express only type I collagen. Hypertrophic chondrocytes from differentiating clones were analyzed at the single cell level by immunofluorescence; all the cells were positive for type X collagen, while approximately 50% of them showed positivity for type II collagen.