MCF10A乳房上皮細胞のコンフルエンスによるエストロゲンスルホトランスフェラーゼ発現の調節：アリール炭化水素受容体の役割

エストロゲンスルホトランスフェラーゼ（SULT1E1）は、エストロゲンのスルホン化を触媒し、エストロゲンのマイトジェン性を制限します。最近、Sult1E1の発現は、膨張膨張前MCF10Aヒト乳房上皮細胞では低いが、細胞がコンフルエントになると増加すると報告した。5-ブロモリジンによるパルスチェース標識実験により、Sult1E1発現の合流媒介の増加はmRNA合成の増加によるものであることが示されました。アリール炭化水素受容体（AHR）活性化はSult1E1の発現を抑制し、細胞間接触の喪失が他の細胞タイプのAHRを活性化することが示されているため、Sult1e1発現の合流関連の変化がAHRによって媒介されたかどうかをテストしました。。Confluent MCF10A細胞と比較して、プレコンフルエント細胞はCYP1A1 mRNAのレベルが高く、AHR応答性ルシフェラーゼレポーターの活性化が大きく、AHRが膨張前細胞で活性であることを示しています。AHRおよびアリール炭化水素受容体核トランスロケーターmRNAおよびタンパク質レベルも、コンフルエント培養よりもプレカンフルエントの方が高かった。AHR拮抗薬、3'-メトキシ-4'-ニトロフラボン（MNF）、またはAHRノックダウンによるプレカンフルエント細胞の治療は、SULT1E1発現を有意に増加させました。sult1e1 5'層状領域の約7キロ塩基を含むルシフェラーゼレポーターを安定にトランスフェクトしたMCF10A細胞は、MNFおよび合流誘導性のルシフェラーゼ発現の両方を示しました。レポーターを一時的にトランスフェクトした前流出細胞は、MNF処理およびAHRノックダウン媒介ルシフェラーゼ誘導の両方を示しましたが、ヌクレオチド（NT）-3476での計算予測ダイオキシン応答要素（DRE）の変異はこれらの効果を減衰させませんでした。これらの結果は、MCF10A細胞におけるSult1E1発現が、NT -3476のDREを介して媒介されないAHRの抑制作用を介して合流によって転写的に調節されることを示しています。

Estrogen sulfotransferase (SULT1E1) catalyzes the sulfonation of estrogens, which limits estrogen mitogenicity. We recently reported that SULT1E1 expression is low in preconfluent MCF10A human breast epithelial cells but increases when the cells become confluent. Pulse-chase labeling experiments with 5-bromouridine demonstrated that the confluence-mediated increase in SULT1E1 expression was due to increased mRNA synthesis. Because aryl hydrocarbon receptor (AhR) activation has been shown to suppress SULT1E1 expression and loss of cell-cell contact has been shown to activate the AhR in other cell types, we tested whether the confluence-associated changes in SULT1E1 expression were mediated by the AhR. Relative to confluent MCF10A cells, preconfluent cells had higher levels of CYP1A1 mRNA and greater activation of an AhR-responsive luciferase reporter, demonstrating that the AhR was active in the preconfluent cells. AhR and aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator mRNA and protein levels were also higher in preconfluent than in confluent cultures. Treatment of preconfluent cells with the AhR antagonist, 3'-methoxy-4'-nitroflavone (MNF), or AhR knockdown significantly increased SULT1E1 expression. MCF10A cells stably transfected with a luciferase reporter containing ∼7 kilobases of the SULT1E1 5'-flanking region showed both MNF- and confluence-inducible luciferase expression. Preconfluent cells transiently transfected with the reporter showed both MNF treatment- and AhR knockdown-mediated luciferase induction, but mutation of a computationally predicted dioxin response element (DRE) at nucleotide (nt) -3476 did not attenuate these effects. These results demonstrate that SULT1E1 expression in MCF10A cells is transcriptionally regulated by confluence through a suppressive action of the AhR, which is not mediated through a DRE at nt -3476.