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Transfusion2012Mar01Vol.52issue(3)

アネキシンV標識によるアポトーシスCD34+細胞のフローサイトメトリー評価は、生着の臍帯血の効力の予測を改善する可能性があります

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文献タイプ:
  • Evaluation Study
  • Journal Article
概要
Abstract

背景:核染色7-アミノアクチノマイシンD(7AAD)を使用した標準フローサイトメトリーによって一般的に評価されます。しかし、7AADは、脳血液(CORD)移植の動物モデルに不十分なアポトーシスではなく、壊死性および後期アポトーシス細胞のみを検出します。したがって、標準的な方法は、特定の条件下でコードユニットの生着効力を過大評価する可能性があります。 研究の設計と方法:アポトーシスイベントを検出するには、定量的な標準的な列挙と並行して、7AADおよびアネキシンV(ANNV)でコストをかけることが使用されました。コードユニットは、染色方法とコロニー形成ユニット(CFU)の両方を使用して凍結保存の前後に評価され、「機能的なフローサイトメトリー」アプローチを使用して移植効力を予測できるかどうかを判断しました。 結果:7AADに合った集団内で、かなりの数のCD34+ ANNV+イベントが見つかりました。非アポトーシス細胞用量(CD34+ ANNV-)は、小規模(n = 10)と大規模銀行研究(n = 107)の両方でCFUとよく相関していました。最後に、時間を伴うサンプル後のサンプルに続いて、アポトーシスCD34+細胞の数が増えていることが示され、その結果、ANNV評価された用量は、標準列挙と比較してCFUの予測に優れていました。 結論:CD34+細胞のアポトーシス集団を定義すると、CFUの予測が改善され、この方法が臨床使用のためのコードユニットの評価のための迅速な効力テストになりました。

背景:核染色7-アミノアクチノマイシンD(7AAD)を使用した標準フローサイトメトリーによって一般的に評価されます。しかし、7AADは、脳血液(CORD)移植の動物モデルに不十分なアポトーシスではなく、壊死性および後期アポトーシス細胞のみを検出します。したがって、標準的な方法は、特定の条件下でコードユニットの生着効力を過大評価する可能性があります。 研究の設計と方法:アポトーシスイベントを検出するには、定量的な標準的な列挙と並行して、7AADおよびアネキシンV(ANNV)でコストをかけることが使用されました。コードユニットは、染色方法とコロニー形成ユニット(CFU)の両方を使用して凍結保存の前後に評価され、「機能的なフローサイトメトリー」アプローチを使用して移植効力を予測できるかどうかを判断しました。 結果:7AADに合った集団内で、かなりの数のCD34+ ANNV+イベントが見つかりました。非アポトーシス細胞用量(CD34+ ANNV-)は、小規模(n = 10)と大規模銀行研究(n = 107)の両方でCFUとよく相関していました。最後に、時間を伴うサンプル後のサンプルに続いて、アポトーシスCD34+細胞の数が増えていることが示され、その結果、ANNV評価された用量は、標準列挙と比較してCFUの予測に優れていました。 結論:CD34+細胞のアポトーシス集団を定義すると、CFUの予測が改善され、この方法が臨床使用のためのコードユニットの評価のための迅速な効力テストになりました。

BACKGROUND: Nonviable CD34+ cells are commonly assessed by standard flow cytometry using the nuclear stain 7-aminoactinomycin D (7AAD). 7AAD, however, only detects necrotic and late apoptotic cells, not earlier apoptosis, which engraft poorly in animal models of cord blood (cord) transplantation. The standard method, therefore, may overestimate engraftment potency of cord units under certain conditions. STUDY DESIGN AND METHODS: To detect apoptotic events, costaining with 7AAD and annexin V (AnnV), in parallel with the quantitative, standard enumeration, was used. Cord units were assessed before and after cryopreservation using both staining methods and colony-forming units (CFU) to determine if graft potency can be predicted using a "functional flow cytometry" approach. RESULTS: Significant numbers of CD34+ AnnV+ events were found within the 7AAD-gated population. Nonapoptotic cell dose (CD34+ AnnV-) correlated well with CFUs in both a small-scale (n = 10) and a large-scale banking study (n = 107). Finally, following samples postthaw with time showed increasing numbers of apoptotic CD34+ cells and consequently the AnnV assessed dose was better at predicting the CFU compared with just the standard enumeration. CONCLUSION: Defining the apoptotic population of CD34+ cells improved the prediction of CFU, making this method a rapid test of potency for assessment of cord units for clinical use.

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