成長ホルモン受容体（GHR）C899DUPC変異は、支配的な陰性として機能します：細胞内GHR欠損の病態生理学への洞察

コンテキスト：GHの無感覚（GHI）は、発音されたIGF-I欠乏と重度の短い身長を特徴とする条件です。GHIを呈する患者で、以前に、新規化合物ヘテロ接合GH受容体（GHR）変異、P.R229H/C.899DUPCを特定しました。ヘテロ接合P.R229H（プレペプチド）バリアントは、適切な機能的研究が不足しているにもかかわらず、以前はGHIと関連していた。新規ヘテロ接合GHR：c.899DUPCバリアントは、GHR細胞内ドメインの重要なJAK2結合ボックス1領域に影響します。複製は、フレームシフトと初期のタンパク質終了を予測しました。 目的：P.R229Hおよびc.899DUPC変異の個々と相乗効果は、再構成研究で評価されました。 結果：組換えヒトGHR（HGHR）：p.R229Hバリアントは容易に発現し、予想外に、転写5b（STAT5B）のリン酸化のGH誘導シグナルトランスデューサーと活性化因子が野生型HGHRによって誘導されるものと同等でした。対照的に、切り捨てられた、免疫検出されたHGHR：c.899DUPCバリアントは、GHに反応しませんでした。複合ヘテロ接合状態を模倣するために、2つのバリアントが共発現し、驚くべきことに、HGHR：C.899DUPCの存在は、HGHR：P.R229Hのみで観察されたGH誘導STAT5B活性を効果的に廃止しました。さらに、HGHR：C.899DUPCは、HGHR：P.R229Hに関連するGH誘導STAT5B活性を用量依存的に減少させました。この支配的な負の効果は、HGHR：C.899DUPCが野生型HGHRと共発現した場合にも観察されました。 結論：以前の報告に反して、P.R229Hバリアントは、野生型GHRのように機能するように見えたため、GHIを引き起こす可能性は低い。C.899DUPCバリアントは、正常なGHRシグナル伝達を破壊する新規支配的な負の変異であり、報告された患者のGHI表現型の原因です。

CONTEXT: GH insensitivity (GHI) is a condition characterized by pronounced IGF-I deficiency and severe short stature. We previously identified a novel compound heterozygous GH receptor (GHR) mutation, GHR:p.R229H/c.899dupC, in a patient presenting with GHI. The heterozygous p.R229H (prepeptide) variant was previously associated with GHI despite a lack of adequate functional studies. The novel heterozygous GHR:c.899dupC variant affects the critical JAK2-binding Box 1 region of the GHR intracellular domain; the duplication predicted a frameshift and early protein termination. OBJECTIVE: The individual and synergistic effect(s) of the p.R229H and c.899dupC mutations on GHR function(s) were evaluated in reconstitution studies. RESULTS: The recombinant human GHR (hGHR):p.R229H variant was readily expressed, and unexpectedly, GH-induced signal transducer and activator of transcription 5b (STAT5b) phosphorylation was comparable to that induced by wild-type hGHR. The truncated, immunodetected hGHR:c.899dupC variant, in contrast, was unresponsive to GH. To mimic a compound heterozygous state, the two variants were coexpressed, and strikingly, the presence of the hGHR:c.899dupC effectively abolished the GH-induced STAT5b activities that were observed with hGHR:p.R229H alone. Furthermore, hGHR:c.899dupC dose-dependently reduced the GH-induced STAT5b activities associated with hGHR:p.R229H. This dominant negative effect was also observed when hGHR:c.899dupC was coexpressed with wild-type hGHR. CONCLUSION: The p.R229H variant, contrary to an earlier report, appeared to function like wild-type GHR and, therefore, is unlikely to cause GHI. The c.899dupC variant is a novel dominant negative mutation that disrupted normal GHR signaling and is the cause for the GHI phenotype of the reported patient.