狂犬病/小胞口炎ウイルスキメラエンベロープ糖タンパク質によるHIV-1レンチウイルスベクターの擬似タイピング効率の向上

狂犬病ウイルス糖タンパク質（RVG）は、高血球口炎ウイルス糖タンパク質（VSVG）の効率が低いものの、レンチウイルス性ベクターを偽物型にすることができます。げっ歯類中枢神経系（CNS）のVSVG-型型ベクトルを使用した形質導入は、局所的な神経型遺伝子導入につながりますが、RVGと型のベクターを使用すると、遠位遠位部位に位置するニューロンの追加の分散変換が軸索逆行輸送を介して発生します。前臨床および臨床試験のために、高チットルのRVGと型と型のレンチウイルスベクターを生成しようとする試みは、これまでに問題がありました。いくつかのキメラRVG/VSVG糖タンパク質を構築し、RVGの外部/膜貫通ドメインとVSVGの細胞質ドメインを持つ構造が、HIV-1レンチウイルス粒子への取り込みの増加を示し、293T細胞のin vitroでの感染性の増加を示していることを発見しました。ヒト、ラット、マウスの起源の細胞株。ラット線条体におけるこのRVG/VSVGキメラを使用したベクターと型型のベクターの定位応用は、神経とグリアのトロピズムの両方を示す注射部位で効率的な遺伝子導入をもたらしました。逆行性軸索輸送を介した重大なnigra、視床、および嗅球の遠位神経導入は、RVG分離型ベクターで観察されたものと同様のレベルでキメラと型型のベクターの海外投与後にも発生します。これは、嗅球における遠位導入の最初の報告です。このエンベロープを使用した強化された仮名タイプ化は、CNSで効率的な局所的および分散ニューロン変換を示す高チットルの仮名型レンチウイルスベクターの容易な生産を可能にするはずです。

Rabies virus glycoprotein (RVG) can pseudotype lentiviral vectors, although at a lower efficiency to that of vesicular stomatitis virus glycoprotein (VSVG). Transduction with VSVG-pseudotyped vectors of rodent central nervous system (CNS) leads to local neurotropic gene transfer, whereas with RVG-pseudotyped vectors additional disperse transduction of neurons located at distal efferent sites occurs via axonal retrograde transport. Attempts to produce high-titre RVG-pseudotyped lentiviral vectors for preclinical and clinical trials has to date been problematic. We have constructed several chimeric RVG/VSVG glycoproteins and found that a construct bearing the external/transmembrane domain of RVG and the cytoplasmic domain of VSVG shows increased incorporation onto HIV-1 lentiviral particles and has increased infectivity in vitro in 293T cells and in differentiated neuronal cell lines of human, rat and murine origin. Stereotactic application of vector pseudotyped with this RVG/VSVG chimera in the rat striatum resulted in efficient gene transfer at the site of injection showing both neuronal and glial tropism. Distal neuronal transduction in the substantia nigra, thalamus and olfactory bulb via retrograde axonal transport also occurs after intrastriatal administration of chimera-pseudotyped vectors at similar levels to that observed with a RVG-pseudotyped vector. This is the first report of distal transduction in the olfactory bulb. The enhanced pseudotyping with this envelope should enable easier production of higher-titre pseudotyped lentiviral vectors that exhibit efficient local and dispersed neuronal transduction in the CNS.