トリプトファンシンターゼアルファサブユニットモニタリングの1H-NMRスペクトルにおけるチロシン共鳴の割り当て49位の置換による立体構造の変化

アミノ酸置換に起因する溶液中の大腸菌からのトリプトファンシンターゼアルファサブユニットの立体構造変化を監視するために、1H-NMRスペクトルの芳香族領域におけるTyr共鳴を特定の残基に割り当てました。[2,3,4,5,6-2H5] PHEおよび[3,5-2H2] Tyrで整白されたアルファサブユニットのスペクトルでは、TYRのC2およびC6プロトンは酸性P2Hで完全に単離された信号を与えました。C3およびC5陽子共鳴の一部は、酸性P2Hで互いに重なり合っています。各TYRが彼またはPHEに単独で置換された一連の変異αサブユニットを使用することにより、芳香族領域の7つのTyr共鳴のそれぞれを特定の残基に割り当てることができます。私たちは以前、位置49で一連のバリアントアルファサブユニットの立体構造の安定性を研究してきました[Yutani et al。（1987）Proc。Natl Acad。SCI。USA 84、4441-4444]。現在、GLU-49の代わりにPHEまたはGlyに置き換えられた野生型アルファサブユニットおよび変異αサブユニットの芳香族領域の1H-NMRスペクトルを比較します。結果は、位置49での置換の主要な立体配座効果が、置換の位置に近い局在化されていることを示唆しています。

In order to monitor the conformational changes of tryptophan synthase alpha-subunit from Escherichia coli in solution resulting from amino acid substitutions, we have assigned the Tyr resonances in the aromatic region of the 1H-NMR spectrum to specific residues. In the spectrum of the alpha-subunit deuterated with [2,3,4,5,6-2H5]Phe and [3,5-2H2]Tyr, the C2 and C6 protons of Tyr gave completely isolated signals at acidic p2H. Some of the C3 and C5 proton resonances overlapped with each other at acidic p2H. By using a series of mutant alpha-subunits in which each Tyr was singly substituted with His or Phe, we can now assign each of seven Tyr resonances in the aromatic region to a specific residue. We have previously studied the conformational stability of a series of variant alpha-subunits at position 49 [Yutani et al. (1987) Proc. Natl Acad. Sci. USA 84, 4441-4444]. We now compare the 1H-NMR spectra in the aromatic region of the wild-type alpha-subunit and mutant alpha-subunits substituted with Phe or Gly in place of Glu-49. The results suggest that the major conformational effects of substitutions at position 49 are localized close to the position of substitution.