ヒト肺腺癌細胞株A549におけるCRTXの抗腫瘍活性

AIM：ヒト肺腺癌A549細胞において、ピットViper Crotalus durissus durissus grotalus durissus grotalus durissus sterificusから抽出された強力な神経毒であるクロトキシン（CRTX）の細胞毒性効果を評価します。 方法：A549細胞を勾配濃度のCRTXで処理し、細胞周期とアポトーシスをフローサイトメトリーアッセイを使用して分析しました。細胞エフェクターp53、カスパーゼ-3、および切断されたカスパーゼ-3、合計p38mapkおよびpp38mapkの変化を、ウエスタンブロットアッセイを使用して調査しました。A549異種移植モデルを使用して、in vivoでの腫瘍成長に対するCRTXの阻害を調べました。 結果：A549細胞をCRTX（25-200μg/mL）で48時間処理し、用量依存的に細胞の成長を著しく阻害しました（IC（50）=78μg/mL）。24時間CRTX（25μg/mL）での治療により、G1停止が発生し、細胞アポトーシスが誘発されました。CRTX（25μg/mL）は、WT P53、カスパーゼ-3およびホスホ-P38Mapkを切断した発現を有意に増加させました。特定のP38MAPK阻害剤SB203580（5μmol/L）による前処理は、CRTX誘発アポトーシスを有意に減少させ、カスパーゼ-3レベルを切断しましたが、G（1）停止は変化せず、高度に発現したP53が持続しました。CRTXの腹腔内注射（10μg/kg、週に2回4週間）は、A549腫瘍異種移植の増殖を有意に阻害し、MVDおよびVEGFレベルの低下を阻害しました。 結論：CRTXは、おそらくP38MAPKとカスパーゼ-3の活性化により、およびWT P53発現の増加によって媒介される細胞周期停止により、細胞アポトーシスを誘導することにより、抗腫瘍効果が有意な効果をもたらしました。さらに、CRTXはin vivoで抗血管新生効果を示しました。

AIM: To assess the cytotoxic effect of crotoxin (CrTX), a potent neurotoxin extracted from the venom of the pit viper Crotalus durissus terrificus, in human lung adenocarcinoma A549 cells and investigated the underlying mechanisms. METHODS: A549 cells were treated with gradient concentrations of CrTX, and the cell cycle and apoptosis were analyzed using a flow cytometric assay. The changes of cellular effectors p53, caspase-3 and cleaved caspase-3, total P38MAPK and pP38MAPK were investigated using Western blot assays. A549 xenograft model was used to examine the inhibition of CrTX on tumor growth in vivo. RESULTS: Treatment of A549 cells with CrTX (25-200 μg/mL) for 48 h significantly inhibited the cell growth in a dose-dependent manner (IC(50)=78 μg/mL). Treatment with CrTX (25 μg/mL) for 24 h caused G1 arrest and induced cell apoptosis. CrTX (25 μg/mL) significantly increased the expression of wt p53, cleaved caspase-3 and phospho-P38MAPK. Pretreatment with the specific P38MAPK inhibitor SB203580 (5 μmol/L) significantly reduced CrTX-induced apoptosis and cleaved caspase-3 level, but G(1) arrest remained unchanged and highly expressed p53 sustained. Intraperitoneal injection of CrTX (10 μg/kg, twice a week for 4 weeks) significantly inhibited A549 tumor xenograft growth, and decreased MVD and VEGF levels. CONCLUSION: CrTX produced significant anti-tumor effects by inducing cell apoptosis probably due to activation of P38MAPK and caspase-3, and by cell cycle arrest mediated by increased wt p53 expression. In addition, CrTX displayed anti-angiogenic effects in vivo.