無細胞系における脳脊髄炎ウイルスの合成：DNAから1つのチューブのRNAウイルスまで

ウイルス粒子は、ワクチン接種、薬物送達、材料科学に使用されます。ここでは、RNAウイルス脳脊髄筋膜炎ウイルス（EMCV）がin vitroでDNAテンプレートから合成されるシステムを考案しました。T7プロモーター/ターミネーターユニットにEMCVの全長cDNAを抱えるプラスミドまたはPCR産物を、T7 RNAポリメラーゼを補充したHeLa細胞抽出物にインキュベートした場合、EMCVはEMCV RNAとともにプログラムされたシステムと比較して10倍以上の効率で4時間以内に生成されました。ウイルスにエンコードされたRNA依存性RNAポリメラーゼによって転写されたEMCV RNAは、プラスミドからT7 RNAポリメラーゼによって転写された大量のEMCV RNAが存在する場合でも、主にEMCV粒子に組み込まれました。

Virus particles are used in vaccination, drug delivery, and material sciences. Here we devised a system where the RNA virus encephalomyocarditis virus (EMCV) is synthesized from DNA templates in vitro. When a plasmid or a PCR product harboring the full-length cDNA of EMCV in the T7 promoter/terminator unit was incubated in a HeLa cell extract supplemented with T7 RNA polymerase, EMCV was produced within 4 h at an efficiency of over 10-fold compared with the system programmed with the EMCV RNA. The EMCV RNA transcribed by the virally encoded RNA-dependent RNA polymerase was predominantly incorporated into the EMCV particle even in the presence of a larger amount of the EMCV RNA transcribed by T7 RNA polymerase from the plasmid.