マクロファージ細胞内の1,2-ジアミノアントラキノンとその一酸化窒素反応生成物の蛍光

一酸化窒素（NO）は多くの生物学的プロセスに関与しています。芳香族オルソダイアミン誘導体は、生細胞のNOの蛍光イメージングで一般的に使用されています。オルソジアミノ（O-ジアミノ）化合物は、トリアゾール誘導体の形成につながる酸素化培地でNOと反応すると考えられています。そのようなO-ジアミノ化合物1,2-ジアミノアントラキノン（DAA）の1つは、生きている組織および細胞でNOを検出するための非毒性プローブです。細胞内のNO/O（2）とDAAと反応する際のDAAトリアゾール誘導体（DAA-TZ）の形成は、以前には実証されていません。この研究の目的は、DAAが酸素の存在下でNOと反応するときにDAA-TZが細胞内に形成される種であることを確認することでした。DAA-TZの化学合成と特性評価は、DAAおよびDAA-TZの細胞内研究とともに実施されました。RAW 264.7マクロファージには、インターフェロン-γおよびリポ多糖による刺激または刺激の条件下でDAAまたはDAA-TZを搭載し、NOを産生しました。共焦点顕微鏡を使用して、DAA搭載マクロファージ細胞を画像化しました。発光スペクトルの分析により、マクロファージ細胞内の各種の蛍光の正確な識別が可能になり、酸素の存在下でのDAA以降のNOの間の細胞内反応産物としてのDAA-TZの同一性が確認されました。

Nitric oxide (NO) is involved in many biological processes. Aromatic ortho-diamine derivatives are commonly used in the fluorescence imaging of NO in living cells. ortho-diamino (o-diamino) compounds are believed to react with NO in an oxygenated medium leading to the formation of a triazole derivative. One such o-diamino compound, 1,2-diaminoanthraquinone (DAA), is a nontoxic probe for the detection of NO in living tissues and cells. The formation of the DAA triazole derivative (DAA-TZ) upon reaction of DAA with NO/O(2) within cells has not been demonstrated previously. The aim of this study was to confirm that DAA-TZ is the species formed intracellularly when DAA reacts with NO in the presence of oxygen. The chemical synthesis and characterisation of DAA-TZ was performed together with intracellular studies of DAA and DAA-TZ. Raw 264.7 macrophages were loaded with the DAA or DAA-TZ under conditions of no-stimulation or stimulation with interferon-γ and lipopolysaccharide to produce NO. Confocal microscopy was used to image the DAA-loaded macrophage cells. Analysis of the emission spectra allowed precise discrimination of the fluorescence of each species in the macrophage cells, and confirmed the identity of DAA-TZ as the intracellular reaction product between DAA and NO in the presence of oxygen.