ビーズベースのマルチプレックスサンドイッチ免疫測定法を使用した受容体チロシンキナーゼ阻害剤プロファイリング

受容体チロシンキナーゼ（RTK）は、創薬プロセスにおける重要な標的です。RTKのリン酸化パターンを研究することで、それらの活性化と不活性化状態の決定が可能になります。マルチプレックスビーズベースのサンドイッチ免疫アッセイは、細胞シグナル伝達ネットワーク内の主要な調節因子のリン酸化状態を測定するための強力なツールです。ここでは、例として表皮成長因子受容体（EGFR）を使用した受容体チロシンキナーゼのリン酸化状態の分析について説明します。EGFRとその一般的なチロシンリン酸化の相対的な定量化を可能にするビーズベースのサンドイッチイムノアッセイのプロトコルを提供します。また、7つの受容体チロシンキナーゼの分析のために96ウェル細胞培養プレートと市販のキットを使用したキナーゼ阻害剤実験からのデータを提示します。

Receptor tyrosine kinases (RTK) are important targets in drug discovery processes. Studying the phosphorylation pattern of RTKs enables the determination of their activation and inactivation states. Multiplex bead-based sandwich immunoassays are powerful tools for measuring the phosphorylation state of key regulators within cellular signalling networks. Here, we describe the analysis of the phosphorylation state of receptor tyrosine kinases using the epidermal growth factor receptor (EGFR) as an example. We provide a protocol for a bead-based sandwich immunoassay that enables a relative quantification of the EGFR and its generic tyrosine phosphorylation. We also present data from a kinase inhibitor experiment using 96-well cell-culture plates and a commercially available kit for the analysis of seven receptor tyrosine kinases.