7β-ヒドロキシコレステロール誘発エネルギーストレスは、連続的な反対のシグナル伝達応答とC6膠芽腫細胞の死につながります

7β-ヒドロキシコレステロール細胞毒性は、in vivoおよびin vitroでそのエステルの蓄積に依存することが示されています。7β-ヒドロキシコレステロール処理C6細胞から分離された膜マイクロドメインは、コレステロール：コレステロールエステル比が低下し、7keto-ヒドロキシコレステロール、7β-ヒドロキシコールエステロール、7β-ヒドロキシコールステロールを蓄積していることを、洗剤を含まないRAFTの準備とLC/MS脂質含有量分析を使用して、研究において研究中に示されています。7β-ヒドロキシコレステロールエステル。脂質含有量のこれらの修飾には、脂質ラフトにおけるフロチリン-1の再分配が伴います。7β-ヒドロキシコレステロール治療の最初の12時間におけるAMPKリン酸化とミトコンドリア活性の一時的な増加は、C6細胞がエネルギーストレスを受け、酸化的リン酸化を増加させることを示しています。それでも、グルコースの取り込みが減少するまで、ATPレベルは15時間の間に維持されます。ラフトの変更とエネルギーストレスに対するセルの回答は、ERK、AMPK、PI3K/Aktなどのさまざまなシグナル伝達経路の連続的な活性化です。エネルギーストレス条件下で活性化されることが知られているこれらの経路は、それぞれ6時間（ERK、AMPK）および12時間（AKT）の治療で一時的に活性化され、細胞生存から細胞増殖へのシフトを示唆しています。7β-ヒドロキシコレステロール誘発ストレスの持続性は、24時間後にp38活性化、GSK3βの活性化の喪失、細胞死に至った。最後に、観察されたシグナル伝達応答は7β-ヒドロキシコレステロールのエステル化に依存していることを実証し、7β-ヒドロキシコレステロールのエステル化が細胞毒性に不可欠であることを確認します。

7β-Hydroxycholesterol cytotoxicity has been shown in vivo and in vitro to be dependent on the accumulation of its esters. We show in our study, using a detergent-free raft preparation and LC/MS lipid content analysis, that membrane microdomains isolated from 7β-hydroxycholesterol-treated C6 cells have a reduced cholesterol: cholesterol ester ratio and accumulate 7keto-hydroxycholesterol, 7β-hydroxycholesterol and 7β-hydroxycholesterol esters. These modifications in lipid content are accompanied by a redistribution of flotillin-1 in the lipid rafts. Transient increases of AMPK phosphorylation and mitochondrial activity during the first 12 h of 7β-hydroxycholesterol treatment indicate that C6 cells undergo energy stress and increase oxidative phosphorylation. Even so, ATP levels are maintained during 15 h until glucose uptake decreases. The cell's answers to raft modifications and energy stress are sequential activations of different signaling pathways such as ERK, AMPK and PI3K/Akt. These pathways, known to be activated under energy stress conditions, are transiently activated at 6 h (ERK, AMPK) and 12 h (Akt) of treatment respectively suggesting a shift from cell survival to cell proliferation. The persistence of 7β-hydroxycholesterol-induced stress led after 24 h to P38 activation, loss of GSK3β activation and to cell death. Finally we demonstrate that the observed signaling responses depend on 7β-hydroxycholesterol esterification, confirming that esterification of 7β-hydroxycholesterol is essential for cytotoxicity.