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目的：完全なシーケンス、水平スプレッド、および大規模な院内発生に関与する肺炎菌株のCTX-M-15エンコードマルチュレイタンスプラスミドの安定性を特徴付ける。 方法：220 kbpプラスミドPUUH239.2は、454テクノロジーを使用して完全に配列決定されました。結合宿主範囲、共役頻度、プラスミドの安定性、プラスミドキャリッジのフィットネスコストがin vitroで研究されました。アウトブレイク中の共役拡散は、多重PCRスクリーニング、制限フラグメント長多型、およびPFGEによって遡及的に評価されました。 結果：プラスミドPUUH239.2は、β-ラクタム（BLA（CTX-M-15）、BLA（TEM-1）およびBLA（OXA-1））に対する耐性をコードします。AADA2]、テトラサイクリン[TET（A）およびTETTR]、トリメトプリム（DHFRXII）、スルホナミド（SUL1）、第四紀アンモニウム化合物（QACEΔ1）、マクロライド[MPH（A）-MXR-MPHR（A）]およびヘビーメタルイオン（銀イオン（銀）、銅とヒ素）。プラスミドは、肺炎プラスミドPKPN3と非常に類似した骨格で構成されており、41 kbp耐性領域で、プラスミドPEK499およびPC15-1Aの耐性領域と非常に類似しており、以前に発生した大腸菌株から分離されていたPC15-1A（Lineage ST131）に属しています（ここで、STはシーケンスタイプを表します）。PUUH239.2プラスミドは肺炎K.で安定していますが、大腸菌では不安定であり、素朴な宿主細胞に導入された場合、フィットネスコストを付与します。発生の発生からPUUH239.2を患者の腸内細菌叢の大腸菌に移動したことは、発生中に複数の機会に発生しました。 結論：プラスミドPUUH239.2は、PKPN3 K.肺炎プラスミド骨格とBLA（CTX-M-15）をエンコードするMulteristance Cassetteの複合材料であり、国際的に認識された出現に関連する多発性カセットをエンコードします。結果として生じるプラスミドは、肺炎K.と大腸菌の安定性が異なり、これにより、発生中のこのプラスミドの拡散がおそらく制限されています。
目的：完全なシーケンス、水平スプレッド、および大規模な院内発生に関与する肺炎菌株のCTX-M-15エンコードマルチュレイタンスプラスミドの安定性を特徴付ける。 方法：220 kbpプラスミドPUUH239.2は、454テクノロジーを使用して完全に配列決定されました。結合宿主範囲、共役頻度、プラスミドの安定性、プラスミドキャリッジのフィットネスコストがin vitroで研究されました。アウトブレイク中の共役拡散は、多重PCRスクリーニング、制限フラグメント長多型、およびPFGEによって遡及的に評価されました。 結果：プラスミドPUUH239.2は、β-ラクタム（BLA（CTX-M-15）、BLA（TEM-1）およびBLA（OXA-1））に対する耐性をコードします。AADA2]、テトラサイクリン[TET（A）およびTETTR]、トリメトプリム（DHFRXII）、スルホナミド（SUL1）、第四紀アンモニウム化合物（QACEΔ1）、マクロライド[MPH（A）-MXR-MPHR（A）]およびヘビーメタルイオン（銀イオン（銀）、銅とヒ素）。プラスミドは、肺炎プラスミドPKPN3と非常に類似した骨格で構成されており、41 kbp耐性領域で、プラスミドPEK499およびPC15-1Aの耐性領域と非常に類似しており、以前に発生した大腸菌株から分離されていたPC15-1A（Lineage ST131）に属しています（ここで、STはシーケンスタイプを表します）。PUUH239.2プラスミドは肺炎K.で安定していますが、大腸菌では不安定であり、素朴な宿主細胞に導入された場合、フィットネスコストを付与します。発生の発生からPUUH239.2を患者の腸内細菌叢の大腸菌に移動したことは、発生中に複数の機会に発生しました。 結論：プラスミドPUUH239.2は、PKPN3 K.肺炎プラスミド骨格とBLA（CTX-M-15）をエンコードするMulteristance Cassetteの複合材料であり、国際的に認識された出現に関連する多発性カセットをエンコードします。結果として生じるプラスミドは、肺炎K.と大腸菌の安定性が異なり、これにより、発生中のこのプラスミドの拡散がおそらく制限されています。
OBJECTIVES: To characterize the complete sequence, horizontal spread and stability of the CTX-M-15-encoding multiresistance plasmid of a Klebsiella pneumoniae strain involved in a large nosocomial outbreak. METHODS: The 220 kbp plasmid pUUH239.2 was completely sequenced using 454 technology. The conjugational host range, conjugation frequencies, plasmid stability and fitness cost of plasmid carriage were studied in vitro. Conjugational spread during the outbreak was assessed retrospectively by multiplex PCR screening, restriction fragment length polymorphism and PFGE. RESULTS: Plasmid pUUH239.2 encodes resistance to β-lactams (bla(CTX-M-15), bla(TEM-1) and bla(OXA-1)), aminoglycosides [aac-(6')-1b-cr and aadA2], tetracyclines [tet(A) and tetR], trimethoprim (dhfrXII), sulphonamides (sul1), quaternary ammonium compounds (qacEΔ1), macrolides [mph(A)-mxr-mphR(A)] and heavy metal ions (silver, copper and arsenic). The plasmid consists of a backbone, highly similar to the K. pneumoniae plasmid pKPN3, and a 41 kbp resistance region, highly similar to the resistance regions of plasmids pEK499 and pC15-1a previously isolated from Escherichia coli strains belonging to the outbreak lineage ST131 (where ST stands for sequence type). The pUUH239.2 plasmid is stable in K. pneumoniae but unstable in E. coli and confers a fitness cost when introduced into a naive host cell. Transfer of pUUH239.2 from the outbreak K. pneumoniae clone to the E. coli of the patients' intestinal floras has occurred on multiple occasions during the outbreak. CONCLUSIONS: The plasmid pUUH239.2 is a composite of the pKPN3 K. pneumoniae plasmid backbone and the bla(CTX-M-15)-encoding multiresistance cassette associated with the internationally recognized outbreak strain E. coli ST131. The resulting plasmid differs in stability between K. pneumoniae and E. coli, and this has probably limited the spread of this plasmid during the outbreak.
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