ヒトカルボニルレダクターゼ3（CBR3）のプロモーター内の保存された抗酸化反応要素（ARE）は、マスター酸化還元スイッチNRF2による誘導を媒介します

カルボニルレダクターゼ活性は、いくつかの内因性および外因性カルボニル基質の2つの電子還元を触媒します。最近のデータは、ヒトカルボニルレダクターゼ3（CBR3）の発現がマスター酸化還元スイッチNRF2によって調節されていることを示しています。NRF2は、標的遺伝子のプロモーターにおける保存された抗酸化反応要素（ARE）に結合します。CBR3プロモーターにおける機能的AREの存在はまだ報告されていません。この研究では、レポーターコンストラクトを使用した実験では、プロトタイプのNRF2活性化因子Tert-Butyl Hydroquinone（T-BHQ）がHepG2（2.7倍; P <0.05）およびMCF-7細胞（22倍）の培養でCBR3プロモーター活性を誘導することが示されました。p <0.01）。保存されていることを特定した計算検索では、遠位CBR3プロモーター領域（（-2698））にあります。これの削除は、T-BHQによる治療に応答した基礎プロモーター活性とプロモーター活性の誘導に影響を与えた4212-BP CBR3プロモーターコンストラクトからのものです。（-2698）の削除は、NRF2を過剰発現する細胞におけるCBR3プロモーター活性の誘導にも影響を与えます。電気泳動移動度シフトアッセイ（EMSA）は、特定のタンパク質複合体の（-2698）の結合の増加がT-BHQ処理細胞からの核抽出物中であることを示しました。特定の核タンパク質 - （-2698）におけるNrf2の存在は複合体であり、抗NRF2抗体を使用したEMSA実験で証明されました。これらのデータは、遠位（-2698）がNRF2のプロトタイプ活性化因子に応答してヒトCBR3の誘導を媒介することを示唆しています。

Carbonyl reductase activity catalyzes the two electron reduction of several endogenous and exogenous carbonyl substrates. Recent data indicate that the expression of human carbonyl reductase 3 (CBR3) is regulated by the master redox switch Nrf2. Nrf2 binds to conserved antioxidant response elements (AREs) in the promoters of target genes. The presence of functional AREs in the CBR3 promoter has not yet been reported. In this study, experiments with reporter constructs showed that the prototypical Nrf2 activator tert-butyl hydroquinone (t-BHQ) induces CBR3 promoter activity in cultures of HepG2 (2.7-fold; p<0.05) and MCF-7 cells (22-fold; p<0.01). Computational searches identified a conserved ARE in the distal CBR3 promoter region ((-2698)ARE). Deletion of this ARE from a 4212-bp CBR3 promoter construct impacted basal promoter activity and induction of promoter activity in response to treatment with t-BHQ. Deletion of (-2698)ARE also impacted the induction of CBR3 promoter activity in cells overexpressing Nrf2. Electrophoretic mobility shift assays (EMSA) demonstrated increased binding of specific protein complexes to (-2698)ARE in nuclear extracts from t-BHQ treated cells. The presence of Nrf2 in the specific nuclear protein-(-2698)ARE complexes was evidenced in EMSA experiments with anti-Nrf2 antibodies. These data suggest that the distal (-2698)ARE mediates the induction of human CBR3 in response to prototypical activators of Nrf2.