HCV-RNAのレンチウイルスベクターへのパッケージング

C型肝炎ウイルス（HCV）の感染性分子クローンの出現により、HCVライフサイクルの理解が解き放たれました。ただし、感染性ウイルス粒子を生成するために重要なゲノムRNAのパッケージングは​​、よく理解されていないままです。HCVコアタンパク質とHCV RNAのドメイン1（D1）の分子相互作用は、in vitroで報告されています。HCVゲノム内の遺伝情報の圧縮により、in vivoで包装を研究するための従来の変異アプローチが妨げられているため、HCV RNAとCored1の間の相互作用を評価するための新しい異種システムを開発しました1。このために、VPR融合タンパク質のHIV-1粒子への募集を利用しました。HCVコアD1をVPRに合法化することにより、HCVサブゲノムレプリコンをHIV-1ベースのレンチウイルスベクターにパッケージ化して転送することができました。次に、コアD1の基本的なサブドメインの欠失変異体がHCV RNAの動員にどのように影響したかを調べました。結果は、パッケージングにおけるD1の第1および第3の基本領域の重要な役割を強調しました。興味深いことに、ここで説明するシステムにより、CD81欠陥細胞のフルレングスJFH1ゲノムを動員することができました。これは通常、HCV感染に耐容性があります。この発見は、さまざまな細胞タイプにおけるHCVの複製能力の評価への道を開きます。

The advent of infectious molecular clones of Hepatitis C virus (HCV) has unlocked the understanding of HCV life cycle. However, packaging of the genomic RNA, which is crucial to generate infectious viral particles, remains poorly understood. Molecular interactions of the domain 1 (D1) of HCV Core protein and HCV RNA have been described in vitro. Since compaction of genetic information within HCV genome has hampered conventional mutational approach to study packaging in vivo, we developed a novel heterologous system to evaluate the interactions between HCV RNA and CoreD1. For this, we took advantage of the recruitment of Vpr fusion-proteins into HIV-1 particles. By fusing HCV Core D1 to Vpr we were able to package and transfer a HCV subgenomic replicon into a HIV-1 based lentiviral vector. We next examined how deletion mutants of basic sub-domains of Core D1 influenced HCV RNA recruitment. The results emphasized the crucial role of the first and third basic regions of D1 in packaging. Interestingly, the system described here allowed us to mobilise full-length JFH1 genome in CD81 defective cells, which are normally refractory to HCV infection. This finding paves the way to an evaluation of the replication capability of HCV in various cell types.