拡張PCRのオーバーラップ：導入遺伝子構造の効率的な方法

遺伝子または調節要素を組み合わせてハイブリッド遺伝子を作ることは、生物科学全体で広く使用されている方法論です。ここでは、オーバーラップ拡張PCRと呼ばれるハイブリッド遺伝子構造の最適化されたアプローチについて説明します。この方法では、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を使用して、ハイブリッド遺伝子の効率的かつ信頼できる構造を使用しています。PCRベースのアプローチは、利用可能な制限サイトまたはその他の特定のシーケンスに依存していません。これは、より従来のクローニングまたは再結合方法よりも利点があります。高忠実度DNAポリメラーゼを使用すると、この方法は、最小限の不要な変異を備えた非常に大きな構造（> 20 kb）でも作るために使用できます。最後に、オーバーラップ拡張PCRは、部位指向の突然変異誘発の手段として使用でき、最終的なハイブリッド遺伝子に望ましい変異を導入します。

Combining genes or regulatory elements to make hybrid genes is a widely used methodology throughout the biological sciences. Here, we describe an optimized approach for hybrid gene construction called overlap extension PCR. In this method, the polymerase chain reaction (PCR) is employed for efficient and reliable construction of hybrid genes. A PCR-based approach does not rely on available restriction sites or other specific sequences, an advantage over more conventional cloning or recombineering methods. With the use of high-fidelity DNA polymerase, this method can be used for making even very large constructs (>20 kb) with minimal unwanted mutations. Finally, overlap extension-PCR can be used as a means for site-directed mutagenesis, introducing desired mutations to the final hybrid gene.