LDHベースの細胞毒性アッセイを使用して、死と成長阻害の影響を同時に評価するための簡単なプロトコル

細胞成長阻害および/または細胞死に対する影響を分析することは、生物学的研究の重要な要素です。MTSアッセイとLDHベースの細胞毒性アッセイは、この目的で最も一般的に使用される2つの方法です。しかし、ここでのデータは、MTS細胞増殖アッセイが細胞死または細胞成長阻害の影響を区別できないことを示しました。さらに、元のLDHベースの細胞毒性プロトコルは、成長阻害のある条件で死んだ細胞の割合を大幅に過小評価していました。制限を克服するために、ここでは、追加の条件固有のコントロールを追加することにより、単純な修正LDHベースの細胞毒性プロトコルを示します。したがって、この修正されたプロトコルは、特に成長阻害のある状態で、全体的な効果の測定に加えて、殺害効果のより正確な測定を提供できます。要約すると、ここでは、1つの96ウェルベースのアッセイでの全体的な効果、細胞殺害の割合、および成長阻害を決定できる、単純な修正細胞毒性アッセイをここに示します。これは、多くの研究所の一次スクリーニングの実行可能なオプションであり、高スループットスクリーニングに適応できます。

Analyzing the effects on cell growth inhibition and/or cell death has been an important component of biological research. The MTS assay and LDH-based cytotoxicity assays are two of the most commonly used methods for this purpose. However, data here showed that MTS cell proliferation assay could not distinguish the effects of cell death or cell growth inhibition. In addition, the original LDH-based cytotoxicity protocol grossly underestimated the proportion of dead cells in conditions with growth inhibition. To overcome the limitation, we present here a simple modified LDH-based cytotoxicity protocol by adding additional condition-specific controls. This modified protocol thus can provide more accurate measurement of killing effects in addition to the measurement of overall effects, especially in conditions with growth inhibition. In summary, we present here a simple, modified cytotoxicity assay, which can determine the overall effects, percentage of cell killing and growth inhibition in one 96-well based assay. This is a viable option for primary screening for many laboratories, and could be adapted for high throughput screening.