哺乳類細胞HPRT遺伝子変異アッセイ：試験方法

哺乳類細胞における細菌遺伝子変異アッセイと染色体異常検査の組み合わせを使用すると、哺乳類の特異的変異原剤のごく一部を検出できない場合があります。したがって、現時点では、曝露がほとんどまたはまったくない化合物を除いて、3番目のアッセイを使用する必要があります（DOH（2000）変異原性の化学物質の検査のための保健省。製品と環境）。ヒポキサンチンホスホリオーゼトランスフェラーゼ（HPRT）遺伝子は哺乳類細胞のX染色体上にあり、哺乳類細胞株の遺伝子変異を調査するためのモデル遺伝子として使用されています。このアッセイは、遺伝子変異を引き起こすDNA損傷を引き起こす可能性のある広範囲の化学物質を検出できます。このテストは、チミジンキナーゼ（TK）マウスリンパ腫アッセイ（MLA）と非常によく似た方法論に従い、どちらも哺乳類の遺伝子変異試験のガイドラインに含まれています（OECD（1997）経済協力と開発のための組織。化学物質の検査に関するOECDガイドライン。in vitro哺乳類細胞遺伝子変異試験：476）。HPRTの方法論は、HPRT遺伝子および///タンパク質の機能を破壊する変異が、有毒類似体を使用して正の選択によって検出されるようなものであり、HPRT（ - ）変異体は生存可能なコロニーと見なされます。細菌の逆変異アッセイとは異なり、哺乳類の遺伝子変異アッセイは、遺伝子発現/機能のアブレーションをもたらす突然変異がHPRT（ - ）変異体を生成するため、広範な変異体に反応します。ヒト細胞は容易に使用され、DNA修復のためのノックアウト細胞株などの修飾を伴うHPRTテスト方法論を使用した機械的研究は、テスト化合物の作用モード（MOA）の詳細を提供できます（24）。技術情報とテストの実行方法に関する一般的なアドバイスを使用した代謝の存在下および非存在下で、異なる細胞株でアッセイを実行するための方法論。

Using the combination of bacterial gene mutation assay and chromosomal aberrations test in mammalian cells may not detect a small proportion of mammalian specific mutagenic agents. Therefore, at the current time a third assay should be used, except for compounds for which there is little or no exposure (DOH (2000) Department of Health Guidance for the testing of chemicals for Mutagenicity. Committee on Mutagenicity of Chemicals in Food, Consumer Products and the Environment). The hypoxanthine phosphorybosyl transferase (HPRT) gene is on the X chromosome of mammalian cells, and it is used as a model gene to investigate gene mutations in mammalian cell lines. The assay can detect a wide range of chemicals capable of causing DNA damage that leads to gene mutation. The test follows a very similar methodology to the thymidine kinase (TK) mouse lymphoma assay (MLA), and both are included in the guidelines for mammalian gene mutation tests (OECD (1997) Organisation for Economic Co-operation and Development. Ninth addendum to the OECD Guidelines for the Testing of Chemicals. In Vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test: 476). The HPRT methodology is such that mutations which destroy the functionality of the HPRT gene and or/protein are detected by positive selection using a toxic analogue, and HPRT ( - ) mutants are seen as viable colonies. Unlike bacterial reverse mutation assays, mammalian gene mutation assays respond to a broad spectrum of mutagens, since any mutation resulting in the ablation of gene expression/function produces a HPRT ( - ) mutant. Human cells are readily used, and mechanistic studies using the HPRT test methodology with modifications, such as knock-out cell lines for DNA repair, can provide details of the mode of action (MOA) of the test compound (24).This chapter provides the methodology for carrying out the assay in different cell lines in the presence and absence of metabolism with technical information and general advice on how to carry out the test.