リボソームP（ペプチジル-TRNA）部位でのコドン - 依存性相互作用

渡辺によって導入されたリボソームにtRNAを結合する方法[渡辺、S。（1972）J。Mol。Biol。67、443-457]は、N-アセチル-PHE-TRNA（PHE）の非酵素結合を、ほぼ100％特異性のリボソームアミノアシルTRNA（A）またはペプチジル-TRNA（P）部位のいずれかに許可します。この方法を使用して、NH（2）ブロックされたアミノアシルTRNAおよび脱アシル化されたtRNAのP部位でのコドン - アニストン相互作用の可能性を分析しました。N-アセチル-PHE-TRNA（PHE）は、ポリ（A）プログラムされたリボソームではなく、ポリ（U）プログラムされた70SリボソームのP部位にのみ結合しました。逆mRNA依存性は、n-アセチル - リース-TRNA（LYS）について発見されました。一連の精製された脱アシル化TRNAを、n-アセチル - アミノアシル-TRNAのp部品結合をブロックし、n-アセチルアミノアシル-TRNAをAに誘導する能力のためのポリ（U）およびポリ（A）システムで分析されました。サイト。同族TRNAのみが、バルクtRNAの1/20番目未満の濃度でバルクtRNAと同じくらい効果的でした。対応するコドンが最初の2つのコドン位置で同一または類似の（同じベース文字）であるTRNAは、低いが有意な効果を示しました。他の非認知的TRNAは、NH（2）ブロックされたアミノアシルTRNAをAサイトに向けることができませんでした。クロルテトラサイクリンは、NH（2）ブロックされたアミノアシル-TRNAのPサイト結合も、脱酸TRNAの効果も妨げませんでした。さらに、転座ブロッカービオマイシンは、Aサイトへの結合にもPサイトへの結合も影響しませんでした。両方の抗生物質のこれらの効果は、両方の種類のtRNAがP部位を埋める前にA部位で一時的に結合せず、コドンと依存症の相互作用がP部位で行われることを示しています。

A method for binding tRNA to ribosomes, introduced by Watanabe [Watanabe, S. (1972) J. Mol. Biol. 67, 443-457], permits nonenzymatic binding of N-acetyl-Phe-tRNA(Phe) to either the ribosomal aminoacyl-tRNA (A) or peptidyl-tRNA (P) site with almost 100% specificity. We used this method to analyze a possible codon-anticodon interaction at the P site for NH(2)-blocked aminoacyl-tRNA and deacylated tRNA. N-Acetyl-Phe-tRNA(Phe) bound only to the P site of poly(U)-programmed 70S ribosomes, not to poly(A)-programmed ribosomes. The reverse mRNA dependence was found for N-acetyl-Lys-tRNA(Lys). A series of purified deacylated tRNAs was analyzed in the poly(U) and poly(A) system for abilities to block P-site binding of N-acetyl-aminoacyl-tRNA and to direct the N-acetyl-aminoacyl-tRNA to the A site. Only the cognate tRNA was as effective as the bulk tRNA at a concentration of less than 1/20th that of bulk tRNA. tRNAs whose corresponding codons are identical or similar (same base character) in the first two codon positions showed a low but significant effect. The other noncognate tRNAs were unable to direct the NH(2)-blocked aminoacyl-tRNAs to the A site. Chlortetracycline interfered neither with the P-site binding of NH(2)-blocked aminoacyl-tRNA nor with the effects of deacylated tRNAs. Furthermore, the translocation blocker viomycin affected neither the binding to the A site nor that to the P site. These effects of both antibiotics indicate that both kinds of tRNA do not bind transiently in the A site before filling the P site and that codon-anticodon interaction takes place at the P site.