Jurkat T細胞の免疫学的シナプスでのアクチン逆行性の流れとアクトミオシンIIアーク収縮駆動駆動受容体クラスターダイナミクス

アクチンの逆行性の流れとアクトミオシンII収縮は、両方ともT細胞受容体（TCR）マイクロクラスタと免疫学的シナプス形成の内向きの動きに関与していますが、相対的な寄与を統合および定量化した研究はありません。蛍光ミオシンIIa重鎖およびF-actrin-f-actin-weの新規レポーターを発現するジュラカットT細胞を使用して、遠位超分子活性化クラスター（DSMAC）および末梢筋皮活性化クラスター（PSMAC）がラメリポジアルに対応するという直接的な証拠を提供します（LP）および以前に仮定されたように、それぞれラメラ（LM）アクチンネットワーク。私たちの画像は、LM/PSMACで同心円状および収縮のアクトミオシンIIアーク/リングを明らかにしています。さらに、TCRマイクロクラスターを遠心的に移動する速度は、LP/DSMACおよびLM/PSMACのアクトミオシンIIアーク収縮のアクチン逆行流量の速度に非常に密接に対応しています。シトカラシンDとジャスプラキノリドを使用して、LP/DSMACおよびブレビスタチンのアクチン逆行性の流れを選択的に阻害して、LM/PSMACのアクトミョシンIIアーク収縮を選択的に阻害するため、両方の力が微小TCRマイクロカスタリング輸送に必要であることを実証します。最後に、白血球機能関連抗原1クラスターがLM/PSMACの内面で時間の経過とともに蓄積し、この蓄積がアクトミオシンII収縮に依存することを示します。したがって、アクチン逆行性の流れとアクトミオシンIIアーク収縮は、免疫学的シナプスで協調的に受容体クラスターダイナミクスを駆動します。

Actin retrograde flow and actomyosin II contraction have both been implicated in the inward movement of T cell receptor (TCR) microclusters and immunological synapse formation, but no study has integrated and quantified their relative contributions. Using Jurkat T cells expressing fluorescent myosin IIA heavy chain and F-tractin-a novel reporter for F-actin-we now provide direct evidence that the distal supramolecular activation cluster (dSMAC) and peripheral supramolecular activation cluster (pSMAC) correspond to lamellipodial (LP) and lamellar (LM) actin networks, respectively, as hypothesized previously. Our images reveal concentric and contracting actomyosin II arcs/rings at the LM/pSMAC. Moreover, the speeds of centripetally moving TCR microclusters correspond very closely to the rates of actin retrograde flow in the LP/dSMAC and actomyosin II arc contraction in the LM/pSMAC. Using cytochalasin D and jasplakinolide to selectively inhibit actin retrograde flow in the LP/dSMAC and blebbistatin to selectively inhibit actomyosin II arc contraction in the LM/pSMAC, we demonstrate that both forces are required for centripetal TCR microcluster transport. Finally, we show that leukocyte function-associated antigen 1 clusters accumulate over time at the inner aspect of the LM/pSMAC and that this accumulation depends on actomyosin II contraction. Thus actin retrograde flow and actomyosin II arc contraction coordinately drive receptor cluster dynamics at the immunological synapse.