DNAリガーゼアデニル化を研究するためのATP、DATP、およびそれらのアルファティオ誘導体の使用

バクテリオファージ-T4およびヒトI型DNAリガーゼは、リボとデオキシリボ - [アルファ35S] Thio-ATPの両方にさらされると自己アデニル化できることがわかりました。ただし、結合反応は、デオキシリボトリオン酸塩の存在下では起こりません。酵素アデニル化は、すべての場合に過剰なPPIによって逆転しますが、チオ誘導体では復帰速度が低くなります。したがって、チオ誘導体を使用して、DNAリガーゼのアデニル化を研究し、ライゲーション反応の最初のステップの特定の阻害剤を検索できます。さらに、チオ誘導体を使用して、固体マトリックスに結合して結合したDNAリガーゼアデニル化活性を検出できることを示しています。

Bacteriophage-T4 and human type I DNA ligases were found capable of self-adenylating upon exposure to both ribo- and deoxyribo-[alpha-35S]thio-ATP. However, the joining reaction does not take place in the presence of the deoxyribotriphosphates. Enzyme adenylation is reversed in all cases by an excess of PPi, but the rate of reversion is lower with thio derivatives. Therefore thio derivatives can be used to study the adenylation of DNA ligases and to search for specific inhibitors of the first step of the ligation reaction. In addition we show that thio derivatives can be used to detect DNA ligase adenylation activity covalently bound to a solid matrix.