Streptococcus gordonii Challisの76キロダルトン細胞表面ポリペプチドをコードする遺伝子の挿入不活性化は、細胞表面の組成と特性に多面的な効果があります

Streptococcus gordonii DL1-Challis DNAのライブラリーがLambda GT11に構築されました。ファージプラークは、S。gordonii細胞表面タンパク質に対して抗血清と反応した抗原の産生についてスクリーニングされました。1.85 kbのS. gordonii DNAを搭載し、大腸菌で29 kDaの分子量を持つ抗原を発現するラムダGT11-CP2を示した組換えファージが分離されました。発現産物と反応した抗体は親和性精製され、S。gordoniiDL1-Challisの76 kDaの分子量を持つ単一のポリペプチド抗原と反応することが示されました。転写ユニット内のクローンDNAのセグメント（0.85 kb）を、エリスロマイシン耐性決定因子を運ぶ非複製プラスミドに連結し、S。gordoniiDL1-Challisに変換されました。染色体に統合されたプラスミド、および76 kDaポリペプチド抗原の発現は廃止されました。遺伝子の不活性化は、細菌の成長や、疎水性や順守を含む多くの表現型特性に明らかな影響を与えませんでした。しかし、それは血清誘発性細胞凝集を廃止し、変異細胞は唾液および初乳免疫グロブリンAの凝集力価を減少させ、いくつかのアクチノマイセス種との凝集も減少させました。野生型および変異体株からの細胞エンベロープタンパク質のドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動プロファイルは、表面に露出した76-kDaポリペプチド、変異細胞の封筒が不足していることを示しました。A. S. gordoniiの76 kDaポリペプチドをコードする遺伝子の発現は、細胞表面の機能的立体構造に重要であると思われました。

A library of Streptococcus gordonii DL1-Challis DNA was constructed in lambda gt11. Phage plaques were screened for production of antigens that reacted with antiserum to S. gordonii cell surface proteins. A recombinant phage denoted lambda gt11-cp2 was isolated that carried 1.85 kb of S. gordonii DNA and that expressed an antigen with a molecular mass of 29 kDa in Escherichia coli. Antibodies that reacted with the expression product were affinity purified and were shown to react with a single polypeptide antigen with a molecular mass of 76 kDa in S. gordonii DL1-Challis. A segment (0.85 kb) of the cloned DNA within the transcription unit was ligated into a nonreplicative plasmid carrying an erythromycin resistance determinant and transformed into S. gordonii DL1-Challis. The plasmid integrated onto the chromosome, and expression of the 76-kDa polypeptide antigen was abolished. The gene inactivation had no obvious effect on bacterial growth or on a number of phenotypic properties, including hydrophobicity and adherence. However, it abolished serum-induced cell aggregation, mutant cells had reduced aggregation titers in saliva and in colostrum immunoglobulin A, and it also reduced coaggregation with some Actinomyces species. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis profiles of cell envelope proteins from wild-type and mutant strains showed that as well as lacking the surface-exposed 76-kDa polypeptide, mutant cell envelopes were deficient in several other polypeptides, including those that bound to immunoglobulin A. Expression of the gene encoding the 76-kDa polypeptide in S. gordonii appeared to be critical for functional conformation of the cell surface.