SLIC：シーケンスおよびライゲーションに依存しないクローニングの方法

ここでは、シーケンスおよびライゲーションに依存しないクローニング（SLIC）の方法について説明します。SLICは、エキソヌクレアーゼであるT4 DNAポリメラーゼを使用して、挿入およびベクター配列に一本鎖DNAオーバーハングを生成します。次に、これらの断片はin vitroで組み立てられ、大腸菌に変換され、関心のある組換えDNAを生成します。SLICインサートは、不完全なPCR（IPCR）または混合PCRによって生成することもできます。SLICを使用した効率性と同時に、5つのインサートを同時に1つの反応で組み立てることができます。SLICは、標準制限酵素を介したクローン化および以前のライゲーション非依存性クローンメソッドを使用した組換えDNAの配列制約を回避し、組換えDNAの効率的な生成のための新しいアプローチを提供します。

We describe here a method for sequence- and ligation-independent cloning (SLIC). SLIC uses an exonuclease, T4 DNA polymerase, to generate single-stranded DNA overhangs in insert and vector sequences. These fragments are then assembled in vitro and transformed into Escherichia coli to generate recombinant DNA of interest. SLIC inserts can also be generated by incomplete PCR (iPCR) or mixed PCR. As many as five inserts can be assembled in one reaction simultaneously with great efficiency using SLIC. SLIC circumvents sequence constraints for recombinant DNA using standard restriction enzyme-mediated cloning and previous ligation-independent cloning methods and provides a new approach for the efficient generation of recombinant DNA.