ムスカリン性アセチルコリン受容体のM3サブタイプは、miR-376b-5pの抑制を介して心臓保護を促進します

ムスカリン性アセチルコリン受容体（M（3）-MACHR）のM（3）サブタイプは、心筋虚血およびミクロナ（miRNA）において保護的な役割を果たし、虚血誘発性心臓損傷を含む多くの心臓病理学的プロセスに関与します。ただし、M（3）-MACHRを介した心臓保護におけるmiRNAの役割は未開拓のままです。本研究は、心筋虚血に対するM（3）-MACHRの心臓保護効果に関与するmiRNAを特定し、基礎となるメカニズムを解明するように設計されました。心筋虚血のラットモデルを確立し、miRNAマイクロアレイ分析を実施して、M（3）-MACHRの心臓保護に関与するmiRNAを特定しました。H9C2細胞では、生存率、細胞内遊離Ca（2+）濃度（[Ca（2+）] I）、細胞内反応性酸素種（ROS）、miR-376B-5p発現レベル、脳由来の神経性因子（BDNF）およびおよび核因子カッパ-B（NF-κB）レベルを測定しました。我々の結果は、M（3）-MACHRが心筋虚血損傷を保護したことを実証しました。マイクロアレイ分析とQRT-PCRは、miR-376b-5pが虚血性心臓組織で有意に上方制御されており、M（3）-machrsアゴニストのコリンがそのアップレギュレーションを逆転させたことを明らかにしました。in vitroでは、miR-376b-5pは、細胞生存率、[Ca（2+）] IおよびROSによって測定されたH（2）O（2）誘発H9C2細胞損傷を促進しました。ウエスタンブロットとルシフェラーゼアッセイは、BDNFがmiR-376B-5pの直接的な標的として同定されました。M（3）-MACHRはNF-κBを活性化し、それによってmiR-376B-5p発現を阻害しました。私たちのデータは、新規M（3）-MACHR/NF-κB/miR-376B-5P/BDNF軸が心臓保護の調節に重要な役割を果たすことを示しています。miR-376b-5pは、おそらくBdnf発現を阻害することにより心筋虚血損傷を促進し、M（3）-MACHRは、NF-κBを介したmiR-376b-5pのダウンレギュレーションによって少なくとも部分的に媒介される心臓保護を提供します。これらの発見は、M（3）-MACHRが心筋虚血損傷に対する心臓保護を提供する潜在的なメカニズムに対する新しい洞察を提供します。

The M(3) subtype of muscarinic acetylcholine receptors (M(3)-mAChR) plays a protective role in myocardial ischemia and microRNAs (miRNAs) participate in many cardiac pathophysiological processes, including ischemia-induced cardiac injury. However, the role of miRNAs in M(3)-mAChR mediated cardioprotection remains unexplored. The present study was designed to identify miRNAs that are involved in cardioprotective effects of M(3)-mAChR against myocardial ischemia and elucidate the underlying mechanisms. We established rat model of myocardial ischemia and performed miRNA microarray analysis to identify miRNAs involved in the cardioprotection of M(3)-mAChR. In H9c2 cells, the viability, intracellular free Ca(2+) concentration ([Ca(2+)]i), intracellular reactive oxygen species (ROS), miR-376b-5p expression level, brain derived neurophic factor (BDNF) and nuclear factor kappa-B (NF-κB) levels were measured. Our results demonstrated that M(3)-mAChR protected myocardial ischemia injury. Microarray analysis and qRT-PCR revealed that miR-376b-5p was significantly up-regulated in ischemic heart tissue and the M(3)-mAChRs agonist choline reversed its up-regulation. In vitro, miR-376b-5p promoted H(2)O(2)-induced H9c2 cell injuries measured by cells viability, [Ca(2+)]i and ROS. Western blot and luciferase assay identified BDNF as a direct target of miR-376b-5p. M(3)-mAChR activated NF-κB and thereby inhibited miR-376b-5p expression. Our data show that a novel M(3)-mAChR/NF-κB/miR-376b-5p/BDNF axis plays an important role in modulating cardioprotection. MiR-376b-5p promotes myocardial ischemia injury possibly by inhibiting BDNF expression and M(3)-mAChR provides cardioprotection at least partially mediated by the downregulation of miR-376b-5p through NF-κB. These findings provide new insight into the potential mechanism by which M(3)-mAChR provides cardioprotection against myocardial ischemia injury.