上方制御されたJag1は、副腎皮質癌の細胞増殖を促進します

目的：この研究の目的は、副腎皮質癌（ACC）におけるNotch発達シグナル伝達経路のリガンドであるJag1の発現と分子の有意性を調べることでした。 実験設計：ヒトマイクロアレイデータは、Notch経路のリガンドを発現する遺伝子について分析され、それぞれRNAおよびタンパク質の定量的リアルタイムPCR（QPCR）および免疫ブロットで検証されました。ACC細胞株は、免疫ブロット、QPCR、および免疫蛍光により、Notch Pathwayメンバーの発現について評価されました。ノッチ経路活性は、レポーター遺伝子（ルシフェラーゼ）活性化を使用しても決定されました。JAG1ノックダウン戦略（JAG1KD）を使用した増殖実験とNotch依存性転写の阻害剤（DNMAML）は、蛍光活性化細胞ソート（FACS）分析を備えた共培養システムを使用しました。ヒトACCサンプルの腫瘍期と有糸分裂速度は、Jag1発現と相関していました。 結果：ノッチリガンドJag1 mRNAとタンパク質はACCで上方制御されています。Jag1のアップレギュレーションは、Jag1、Notch受容体、下流のシグナル伝達分子を発現し、密度依存のNotch活性化を示すY1マウスACC細胞株でモデル化できます。JAG1は、JAG1KDおよび共培養実験を通じて示されるように、標準的なノッチシグナル伝達の活性化により細胞の増殖を促進します。検血性シグナル伝達（DNMAML）のレベルでのノッチシグナル伝達の阻害は、細胞増殖の同様の阻害をもたらします。臨床データの分析は、JAG1発現がACCSのグレードと段階の両方と相関しており、後期段階のACCにおけるJAG1依存のNOTCH活性化の役割をサポートすることを示しています。 結論：JAG1は、ACCSの主要な上方制御されたノッチリガンドであり、隣接する細胞でのノッチシグナル伝達の活性化により、非細胞自律的な方法でACC細胞の増殖と腫瘍の攻撃性を強化します。

PURPOSE: The purpose of this study was to examine the expression and molecular significance of JAG1, a ligand for the Notch developmental signaling pathway, in adrenocortical carcinoma (ACC). EXPERIMENTAL DESIGN: Human microarray data were analyzed for genes expressing ligands for the Notch pathway and validated with quantitative real-time PCR (QPCR) and immunoblots of RNA and protein, respectively. ACC cells lines were assessed for Notch pathway member expression by immunoblot, QPCR, and immunofluorescence. Notch pathway activity was also determined using a reporter gene (luciferase) activation. Proliferation experiments using a Jag1 knockdown strategy (Jag1KD) and an inhibitor of Notch-dependent transcription (DNMaml) used a coculture system with fluorescence-activated cell-sorting (FACS) analysis. Tumor stage and mitotic rate of human ACC samples were correlated to JAG1 expression. RESULTS: The Notch ligand JAG1 mRNA and protein are upregulated in ACCs. JAG1 upregulation can be modeled in the Y1 mouse ACC cell line that expresses Jag1, Notch receptors, downstream signaling molecules, and exhibits density-dependent Notch activation. Jag1 enhances cell proliferation through activation of canonical Notch signaling as shown through Jag1KD and coculture experiments. Inhibition of Notch signaling at the level of postreceptor signaling (DNMaml), results in similar inhibition of cell proliferation. Analysis of clinical data indicates that Jag1 expression correlates with both grade and stage of ACCs, supporting a role of JAG1-dependent Notch activation in late-stage ACCs. CONCLUSIONS: JAG1 is the primary upregulated Notch ligand in ACCs and enhances ACC cell proliferation and tumor aggressiveness in a non-cell-autonomous manner through activation of Notch signaling in adjacent cells.