CRB1遺伝子のRD8変異は、C57BL/6Nマウスおよび胚性幹細胞のベンダー系統に存在し、眼誘導変異体の表現型を混乱させます

目的：眼の表現型を持つ遺伝子操作マウスのいくつかの株における病変の予期しない継承パターンに注目しました。バッククロスのさまざまな段階でC57BL/6に現れた病変は、RD8網膜変性表現型に似ています。誘導された変異マウス系統、ベンダーC57BL/6マウス、および広く使用されている胚性幹細胞におけるこの突然変異の有病率を調べることに着手しました。 方法：眼の病変は、眼底検査と組織病理学によって評価されました。遺伝レベルでのRD8変異の検出は、適切なプライマーを使用してPCRによって実行されました。データは、選択された場合のDNAシーケンスによって確認されました。 結果：眼疾患の表現型を伴ういくつかの誘導変異マウス株の分析により、この疾患は関心のある遺伝子ではなく、CRB1遺伝子のRD8変異の存在と100％関連していることが明らかになりました。一般的な市販ベンダーからのC57BL/6マウスのDNA分析により、すべてのC57BL/6Nサブストレインでホモ接合体のRD8変異の存在が示されましたが、C57BL/6Jサブストレインではありませんでした。ES細胞の生成に使用されるC57BL/6N起源とC57BL/6Nマウス系統の市販の市販の胚性幹細胞のシリーズには、RD8変異も含まれていました。罹患したマウスは、RD8に典型的な眼の病変を示しました。これは、6週齢で眼底と組織病理学によって検出可能でした。 結論：これらの発見は、トランスジェニックおよびノックアウトマウスを生成するために広く使用されているC57BL/6Nマウスの基質におけるRD8変異の存在を特定します。結果は、RD8の存在が関心のある遺伝子または遺伝子とは無関係の重要な疾患の表現型を生成する可能性があるため、目の疾患を研究するためにマウス系統を開発する視力研究コミュニティに重大な影響を及ぼします。研究者は、C57BL/6Nのバックグラウンドでマウス系統が生成され、RD8表現型に似ている場合、または不確定な起源である場合、RD8のスクリーニングを推奨されます。

PURPOSE: We noted an unexpected inheritance pattern of lesions in several strains of gene-manipulated mice with ocular phenotypes. The lesions, which appeared at various stages of backcross to C57BL/6, bore resemblance to the rd8 retinal degeneration phenotype. We set out to examine the prevalence of this mutation in induced mutant mouse lines, vendor C57BL/6 mice and in widely used embryonic stem cells. METHODS: Ocular lesions were evaluated by fundus examination and histopathology. Detection of the rd8 mutation at the genetic level was performed by PCR with appropriate primers. Data were confirmed by DNA sequencing in selected cases. RESULTS: Analysis of several induced mutant mouse lines with ocular disease phenotypes revealed that the disease was associated 100% with the presence of the rd8 mutation in the Crb1 gene rather than with the gene of interest. DNA analysis of C57BL/6 mice from common commercial vendors demonstrated the presence of the rd8 mutation in homozygous form in all C57BL/6N substrains, but not in the C57BL/6J substrain. A series of commercially available embryonic stem cells of C57BL/6N origin and C57BL/6N mouse lines used to generate ES cells also contained the rd8 mutation. Affected mice displayed ocular lesions typical of rd8, which were detectable by funduscopy and histopathology as early as 6 weeks of age. CONCLUSIONS: These findings identify the presence of the rd8 mutation in the C57BL/6N mouse substrain used widely to produce transgenic and knockout mice. The results have grave implications for the vision research community who develop mouse lines to study eye disease, as presence of rd8 can produce significant disease phenotypes unrelated to the gene or genes of interest. It is suggested that researchers screen for rd8 if their mouse lines were generated on the C57BL/6N background, bear resemblance to the rd8 phenotype, or are of indeterminate origin.