残留金属は、LC-UV/MSペプチドマッピングを使用して、タンパク質医薬品のメチオニン酸化測定に変動を引き起こします

メチオニン酸化は、in vitroおよびin vivoでタンパク質の安定性に重要な役割を果たすことが実証されています。また、治療タンパク質の生物活性と免疫原性プロファイルの変化を引き起こす可能性があります。したがって、長期的な安定性研究だけでなく、プロセスと製剤の開発中の生物薬剤のメチオニン酸化を監視することが重要です。メチオニン酸化測定の一般的な分析方法は、質量分析検出の有無にかかわらずUV検出を使用したタンパク質酵素消化物のペプチドマッピング分析です。酸化の定量は、酸化および非酸化ペプチドのUVまたは抽出イオンクロマトグラフィーピーク領域に基づいて行われます。この方法は、長期使用よりも大きなばらつきの影響を受けやすいことがわかりました。この変動につながる主要な要因には、消化バッファー、クロマトグラフィーカラム、LCインジェクター、およびその他のサンプル接触面に低レベルの金属イオン、特に鉄の存在が含まれていました。金属イオンレベルの慎重な制御は、一般に、酸化測定のためのペプチドマッピング方法の変動性と長期的な一貫性をもたらします。

Methionine oxidation has been demonstrated to play an important role in protein stability in vitro and in vivo. It may also cause changes in biological activity and immunogenicity profile of therapeutic proteins. Therefore, it is critical to monitor methionine oxidation in biopharmaceuticals during process and formulation development, as well as long-term stability studies. A common analytical method for methionine oxidation determination is peptide mapping analysis of protein enzymatic digests using UV detection with or without mass spectrometric detection. The quantitation of oxidation is performed based on the UV or extracted ion chromatographic peak areas of the oxidized and non-oxidized peptides. This method was found to be susceptible to significant variability over long-term use. Major factors leading to this variability included presence of low levels of metal ions, especially iron, in the digestion buffer, chromatographic column, LC injector, and other sample contact surfaces. Careful control of metal ion levels generally leads to less variability and long-term consistency of peptide mapping methods for oxidation determination.